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近年来，脑卒中已成为威胁居民健康的重要原因。2017年脑卒中位于引起全球居民死亡和残疾的第三位。2010年美国统计数据显示脑卒中是引起居民过早死亡的第三大疾病，每年有近80万人受到脑卒中的影响。2013年中国国家卫生健康委员会统计显示全国脑卒中患病率为12.2‰。由此可见，脑卒中是引起成年人死亡和身体残疾的主要原因之一，而其中一半以上为缺血性脑卒中。虽然静脉溶栓能够有效改善急性缺血性脑卒中患者结局，但是，受溶栓时间窗的限制，能够接受溶栓治疗的患者仅占极少部分。超过三分之二的幸存脑卒中患者遗留有后遗症，需要完全或部分依赖他人照料。因此，寻求有效的促进神经功能恢复的治疗方法具有重要意义。
多能干细胞具有无限的分化和扩展潜力，它能够促进缺血性脑卒中神经功能的恢复，但同时发现在缺血脑组织中形成了表皮畸胎瘤。这限制了多能干细胞治疗在临床中的应用。与多能干细胞相比，骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells,BMMCs）的分裂和分化能力有限，但具有初级旁分泌作用，能够安全的用于组织再生。近年来的研究表明，动物缺血性脑卒中模型在BMMCs干预后，其组织学和行为学指标均显示改善；少量的临床试验研究也显示BMMCs治疗能够改善患者的预后。但BMMCs促进缺血性脑卒中恢复的的具体机制尚不完全清楚，需要进一步的研究探讨。
目前国内外研究报道BMMCs通过分泌神经营养因子、抑制炎症反应等途径促进神经功能恢复。但针对BMMCs干预后星形胶质细胞数量、神经生长抑制因子及凋亡因子变化的研究尚未见报道。本研究将深入探讨BMMCs在缺血性脑卒中大鼠神经功能恢复中的作用及其可能机制。
第一部分 大鼠骨髓单个核细胞的提取及鉴定
目的：
提取分离具有活性的骨髓单个核细胞（BMMCs），为进一步的动物干预试验做准备。
方法：
无菌条件下冲洗大鼠股骨和胫骨骨髓，获取骨髓液，使用淋巴细胞分离液离心分离骨髓单个核细胞。0.4%台盼蓝染色液鉴定细胞活性。采用细胞免疫组织化学染色观察分离细胞中CD34、CD44、CD45、CD90的表达。
结果：
经0.4%台盼蓝染色液鉴定显示，细胞存活率为93.17%。细胞免疫组织化学染色显示CD34、CD44、CD45、CD90的表达数平均值为（34.33+3.33）、（27.67+2.94）、（42.50+4.09）、（20.83+3.06）。
结论：
本研究分离出的骨髓单个核细胞存活率高，且成分可靠，可用于进一步的移植试验。
第二部分 BMMCs对脑缺血大鼠神经功能恢复及GFAP、Nogo-A、Caspase-3表达的影响
目的：
观察BMMCs对大鼠局灶性脑缺血后右侧额叶缺血周围区GFAP、Nogo-A和Caspase-3表达的影响，并探讨其在神经功能恢复过程中的可能作用机制。
方法：
1、采用Zea-Longa线栓法建立SD大鼠右侧大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，缺血再灌注24h后进行Zea-Longa神经功能缺损评分，选择评分为1分、2分、3分的模型纳入进一步研究。
2、将48只模型按照随机数字表法分为MCAO模型组、BMMCs干预组，每组再进一步按照观察时间点不同，随机分为7d、14d、21d3个亚组，每组8只。
3、缺血再灌注24小时后，将BMMCs通过立体定向技术移植入干预组大鼠模型。
4、大鼠在相应时间点处死前再次进行Zea-Longa评分。采用免疫组织化学染色观察右侧额叶缺血周围脑组织GFAP和Nogo-A的表达，蛋白质印记（western blot）观察右侧额叶缺血周围脑组织剪切型Caspase-3（cleaved Caspase-3）的表达。
结果：
1、干预开始前，MCAO模型组和BMMCs干预组大鼠神经功能缺损评分无统计学差异（P=0.963＞0.05）。干预后，（1）BMMCs组大鼠缺血再灌注14d及21d时缺损评分均低于再灌注7d时（P＜0.05）；（2）BMMCs组大鼠再灌注21d时缺损评分低于再灌注14d时（P＜0.05）；（3）再灌注21d时，BMMCs组大鼠神经功能缺损评分低于MCAO模型组（P＜0.05）。
2、BMMCs组大鼠在再灌注14d及21d时，GFAP的表达数量均高于MCAO组[(37.62±2.45)vs(27.62±1.69)、(38.00±1.85)vs(27.25±1.83),P＜0.05]。
3、BMMCs组大鼠在再灌注14d及21d时，Nogo-A表达数均低于MCAO组[(28.88±2.64)vs(32.50±1.60)、(23.87±2.36)vs(32.00±1.85),P＜0.05]；BMMCs组大鼠再灌注21d时的Nogo-A的表达量低于再灌注14d时[(23.87±2.36)vs(28.88±2.64),P＜0.05]。
4、缺血再灌注21天时，BMMCs组剪切型Caspase-3的表达低于MCAO组剪切型Caspase-3的表达[(0.17±0.07)vs(0.24±0.15)]。
结论：
1、BMMCs治疗可改善局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损程度。
2、BMMCs治疗可增加局灶性脑缺血大鼠缺血周围脑组织GFAP的表达，降低其Nogo-A和剪切型Caspase-3的表达。
3、BMMCs治疗促进局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复，可能与其促进GFAP表达、降低Nogo-A和剪切型Caspase-3的表达有关。
多能干细胞具有无限的分化和扩展潜力，它能够促进缺血性脑卒中神经功能的恢复，但同时发现在缺血脑组织中形成了表皮畸胎瘤。这限制了多能干细胞治疗在临床中的应用。与多能干细胞相比，骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells,BMMCs）的分裂和分化能力有限，但具有初级旁分泌作用，能够安全的用于组织再生。近年来的研究表明，动物缺血性脑卒中模型在BMMCs干预后，其组织学和行为学指标均显示改善；少量的临床试验研究也显示BMMCs治疗能够改善患者的预后。但BMMCs促进缺血性脑卒中恢复的的具体机制尚不完全清楚，需要进一步的研究探讨。
目前国内外研究报道BMMCs通过分泌神经营养因子、抑制炎症反应等途径促进神经功能恢复。但针对BMMCs干预后星形胶质细胞数量、神经生长抑制因子及凋亡因子变化的研究尚未见报道。本研究将深入探讨BMMCs在缺血性脑卒中大鼠神经功能恢复中的作用及其可能机制。
第一部分 大鼠骨髓单个核细胞的提取及鉴定
目的：
提取分离具有活性的骨髓单个核细胞（BMMCs），为进一步的动物干预试验做准备。
方法：
无菌条件下冲洗大鼠股骨和胫骨骨髓，获取骨髓液，使用淋巴细胞分离液离心分离骨髓单个核细胞。0.4%台盼蓝染色液鉴定细胞活性。采用细胞免疫组织化学染色观察分离细胞中CD34、CD44、CD45、CD90的表达。
结果：
经0.4%台盼蓝染色液鉴定显示，细胞存活率为93.17%。细胞免疫组织化学染色显示CD34、CD44、CD45、CD90的表达数平均值为（34.33+3.33）、（27.67+2.94）、（42.50+4.09）、（20.83+3.06）。
结论：
本研究分离出的骨髓单个核细胞存活率高，且成分可靠，可用于进一步的移植试验。
第二部分 BMMCs对脑缺血大鼠神经功能恢复及GFAP、Nogo-A、Caspase-3表达的影响
目的：
观察BMMCs对大鼠局灶性脑缺血后右侧额叶缺血周围区GFAP、Nogo-A和Caspase-3表达的影响，并探讨其在神经功能恢复过程中的可能作用机制。
方法：
1、采用Zea-Longa线栓法建立SD大鼠右侧大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，缺血再灌注24h后进行Zea-Longa神经功能缺损评分，选择评分为1分、2分、3分的模型纳入进一步研究。
2、将48只模型按照随机数字表法分为MCAO模型组、BMMCs干预组，每组再进一步按照观察时间点不同，随机分为7d、14d、21d3个亚组，每组8只。
3、缺血再灌注24小时后，将BMMCs通过立体定向技术移植入干预组大鼠模型。
4、大鼠在相应时间点处死前再次进行Zea-Longa评分。采用免疫组织化学染色观察右侧额叶缺血周围脑组织GFAP和Nogo-A的表达，蛋白质印记（western blot）观察右侧额叶缺血周围脑组织剪切型Caspase-3（cleaved Caspase-3）的表达。
结果：
1、干预开始前，MCAO模型组和BMMCs干预组大鼠神经功能缺损评分无统计学差异（P=0.963＞0.05）。干预后，（1）BMMCs组大鼠缺血再灌注14d及21d时缺损评分均低于再灌注7d时（P＜0.05）；（2）BMMCs组大鼠再灌注21d时缺损评分低于再灌注14d时（P＜0.05）；（3）再灌注21d时，BMMCs组大鼠神经功能缺损评分低于MCAO模型组（P＜0.05）。
2、BMMCs组大鼠在再灌注14d及21d时，GFAP的表达数量均高于MCAO组[(37.62±2.45)vs(27.62±1.69)、(38.00±1.85)vs(27.25±1.83),P＜0.05]。
3、BMMCs组大鼠在再灌注14d及21d时，Nogo-A表达数均低于MCAO组[(28.88±2.64)vs(32.50±1.60)、(23.87±2.36)vs(32.00±1.85),P＜0.05]；BMMCs组大鼠再灌注21d时的Nogo-A的表达量低于再灌注14d时[(23.87±2.36)vs(28.88±2.64),P＜0.05]。
4、缺血再灌注21天时，BMMCs组剪切型Caspase-3的表达低于MCAO组剪切型Caspase-3的表达[(0.17±0.07)vs(0.24±0.15)]。
结论：
1、BMMCs治疗可改善局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损程度。
2、BMMCs治疗可增加局灶性脑缺血大鼠缺血周围脑组织GFAP的表达，降低其Nogo-A和剪切型Caspase-3的表达。
3、BMMCs治疗促进局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复，可能与其促进GFAP表达、降低Nogo-A和剪切型Caspase-3的表达有关。