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镭普克(recombinant allophycocyanin, rAPC)是利用基因重组技术构建的结构单一、构效明确的海洋生物活性多肽,本文对rAPC生产中的关键工艺进行了探索,并对其抗肿瘤活性进行了研究。1. 发酵工艺:在5L高密度发酵中,采用平衡DO-Stat补料策略能显著提高rAPC的生物量,每升发酵液中rAPC含量达3.52g,是常规培养的10倍以上。在20L中试规模的发酵工艺中,采用两步法发酵使rAPC的表达率明显提高,rAPC占菌体可溶性总蛋白的30.24%,比一步法高50%左右。研究表明采用廉价的乳糖替代IPTG诱导rAPC的表达具有可行性。2. 纯化工艺:利用FPLC(快速蛋白纯化层析)系统,建立了适于rAPC大规模生产的三步纯化工艺路线,使rAPC纯度达到98.2%。3. 质控研究:表明rAPC的等电点为6.0,分子量为60kD,并具有与天然APC相似的抗原性,肽图图谱的结果与理论值接近,rAPC最大光吸收波长(λmax)为240nm。4. 高纯度、高活性的rAPC抗肿瘤实验:静脉注射rAPC对小鼠S-180实体瘤及小鼠H22人肝癌瘤模型均有显著的抑制作用,抑瘤率最大分别可达61.9%和62.2%;药理学实验证实rAPC有显著的免疫促进作用。本文工作为rAPC的大规模生产提供了简便、高效的工艺路线和较为系统的质控体系,并获得稳定、显著的抑瘤药效,为药物开发奠定了基础。