气单胞菌属(Aeromonas)是一类严重危害人和水产经济动物的常见致病菌。近几年,高密度人工养鳖业的迅速发展,鳖病也随之大面积暴发,造成了严重的经济损失。2008年,石家庄周边养鳖场暴发群体死亡,继而全省都有发现,给当地养殖户带来巨大损失。本研究从群体死亡的的中华鳖病灶部位分离得到一株病原菌HBJY01,采用传统鉴定方法并结合分子生物学方法,鉴定该菌的属种。用16S rRNA和gyrB基因通过构建系统进化树和计算序列两两间遗传距离的方法,探讨气单胞菌的进化地位。结果表明传统鉴定方法与分子生物学方法鉴定结果一致,HBJY01的16S rRNA和gyrB基因与维氏气单胞菌的相应基因同源性分别为99%和95%。人工感染实验结果表明HBJY01感染健康中华鳖,死亡率100%,症状与群体死亡的中华鳖大体相同。取其病变肝脏分离到相同病原菌。进而根据GenBank报道的维氏气单胞菌外膜蛋白A基因和嗜水气单胞菌hly基因序列分别设计了两对引物,PCR扩增得到ompA和hly基因。序列分析表明,其片段大小分别为1000bp和1500bp,与参考序列同源性分别为97.45%和96.58%。分别将ompA和hly基因定向克隆于原核表达载体pET-28a,构建了重组质粒pET-ompA和pET-hly,又将hly基因片段构建到ompA基因的下游,得到融合质粒pET-ompA-hly。将三种重组质粒分别转化受体菌BL21,得到的阳性重组菌株BL21(DE3)(pET-ompA)、BL21(DE3)(pET-hly)和BL21(DE3)(pET-ompA-hly),经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果表明均有目的蛋白表达;Western blot检测证明表达的目的蛋白为特异性产物。对成功构建的基因工程菌株BL21(DE3)(pET-omp-hly)分别从温度、诱导时间、IPTG浓度方面进行诱导条件的优化,结果表明在37℃,诱导时间6h,IPTG浓度为0.6mmol/L时,蛋白表达量最高,并对基因工程菌株BL21(DE3)(pET-omp-hly)进行动物保护性实验。ELISA和组织切片结果显示基因工程菌株具有较好的免疫保护效果,抗体效价为1:1600。为找到切实可行的免疫途径,本研究采用生物可降解高分子材料PLGA,通过W/O/W法制备口服缓释微球,并对制备工艺进行初步优化,制备得到包封率为68.8%,外观较好的微球。免疫动物实验结果表明保护率较高,达95%,口服免疫后检测抗体水平结果显示,经微球口服免疫的抗体水平较高并且免疫期较长,二免后40天抗体依然呈阳性,为该病的预防奠定了基础。