熏烟和气道内滴入脂多糖引起大鼠慢性阻塞性肺疾病的发病机制和留兰香油对其的影响

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慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是常见的呼吸道疾病,发病率及死亡率均较高,虽然一直受到广泛重视,但目前仍缺乏有效的防治方法。COPD的主要病理特点是气道炎症和肺实质的破坏或肺气肿,气道炎症尤其是小气道炎症是COPD的主要病变及发病的主要原因,然而目前对其气道炎症的本质,特点及其炎症机制认识尚不十分明确。本实验中的留兰香油是一种挥发油,经气相色谱分析其主要成分为柠檬烯(limonene)42.43%,葛缕酮(carvone)35.37%,辛醇(octanol)4.70%,二氢香芹酮(dihydrocarvon)2.27%,等。实验研究发现留兰香对蛋清、二甲苯引起的局部急性炎症有明显的抑制作用,且具有平喘抗过敏作用。我们实验已经发现留兰香油对肺炎克雷伯杆菌和脂多糖所致大鼠COPD模型有保护作用。为了进一步证实留兰香油对COPD的炎症保护作用及其作用机制,我们用反复被动吸烟和气道内滴LPS法所致大鼠COPD模型来研究留兰香油对于COPD的治疗作用及机制研究。目的:探讨慢性阻塞性肺疾病的发病机制,观察留兰香油对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道炎症反应与白细胞介素8(IL-8)和CCR2受体表达的影响。方法:将86只SD大鼠随机分为六组:①正常对照组;②COPD模型组;③留兰香油300 mg·kg-1组;④留兰香油100 mg·kg-1组;⑤留兰香油30 mg·kg-1组;⑥地塞米松治疗组(0.01 mg·kg-1)。用反复被动吸烟和气道内滴入脂多糖12周建立大鼠COPD模型后,留兰香油灌胃治疗4周。观察大鼠COPD模型病理学变化,测定不同浓度Mch诱导下的大鼠气道阻力及肺顺应性,计数大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞总数及分类,肺组织病理切片HE、AB-PAS和Masson三色染色观察气道炎症并行半定量评分及病理图像的形态学测量分析,ELISA检测肺组织IL-8水平,免疫组化法分析肺组织CCR2受体的表达水平。所有数据使用SPSS16.0统计软件进行分析。结果:(1)吸烟大鼠的支气管粘膜和肺实质均有大量炎细胞浸润,肺泡壁结构破坏,形成肺大泡,符合COPD的病理改变。(2)在Mch 0.5,1.0,2.0,8.0 mg·mL-1浓度刺激下,模型组气道阻力均显著高于对照组(P<0.05),在Mch 1.0 mg·mL-1浓度下,留兰香油与模型组相比气道阻力显著降低(P<0.05),在Mch 2.0 mg·mL-1浓度刺激下,模型组肺顺应性显著高于对照组(P<0.05),留兰香油与模型组相比无显著性差异(P>0.05)。(3)模型组大鼠BALF中白细胞总数、分类中中性粒细胞、淋巴细胞及单核巨噬细胞均显著高于对照组(P<0.001),留兰香油各治疗组及地塞米松治疗组与模型组比较均有显著降低(P<0.01)。(4)模型组大鼠可见不同程度的细支气管炎及肺间质炎,炎症细胞明显浸润。留兰香油各用药组可见细支气管炎及肺间质炎症较模型组有所减轻,炎症细胞浸润减少,肺组织病理炎症程度明显减轻。(5)模型组胶原沉积厚度较正常组明显增厚(P<0.001),留兰香油300 mg·kg-1组胶原沉积厚度较模型组明显减小(P<0.001)。(6)模型组肺泡大小不等,肺泡结构紊乱,肺泡壁变薄,并有不同程度的撕裂,融合成肺大泡,与正常组比较,肺平均内衬间隔(Lm)明显增大,单位面积内平均肺泡数(MAN)明显减少,细支气管壁厚度/外径比值明显增高,细支气管壁明显增厚。留兰香油各用药组与模型组比较均能使MAN明显增多、肺泡破坏减少;细支气管壁厚度/外径比值均明显降低,细支气管壁明显变薄。(7)模型组与正常组比较,支气管、细支气管杯状细胞明显增生,杯状细胞阳性%明显增高。留兰香油各用药组和地塞米松治疗组较模型组阳性杯状细胞增生明显减少,杯状细胞阳性%明显降低。(8)ELISA分析显示模型组肺组织匀浆中的IL-8含量显著高于对照组(P<0.001),留兰香油300 mg·kg-1组和留兰香油100 mg·kg-1组与模型组比较均有显著差异(P<0.01);留兰香油30 mg·kg-1组与模型组相比无显著差异(P>0.05)。(9)免疫组化图像分析结果表明模型组肺组织CCR2表达水平显著高于对照组(P<0.01),留兰香油300 mg·kg-1组与模型组比较显著降低(P<0.01),留兰香油30、100 mg·kg-1组和地塞米松治疗组与模型组比较均显著降低(P<0.001)。(10)肺组织匀浆中IL-8含量与BALF中中性粒细胞无相关性。模型组IL-8含量与CCR2灰度值呈负相关(r=-0.774,P<0.05),留兰香油30、100和300 mg·kg-1组IL-8含量与CCR2灰度值呈负相关(r=-0.668,P<0.05;r=-0.867,P<0.05;r=-0.732,P<0.05)。结论:留兰香油对熏烟和脂多糖引起的大鼠COPD模型的肺部炎症有改善作用,能减少细支气管炎和肺间质炎,减少炎症细胞浸润,降低气道阻力,减少胶原沉积增厚,改善肺气肿,抑制杯状细胞增生,其机制可能是留兰香油降低了肺组织IL-8的含量和CCR2受体的表达。
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