芽孢杆菌B<,21>菌株的生物学特性及其拮抗物质分离纯化研究

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从番茄体内分离得的B21菌株,对茄青枯拉尔氏菌有拮抗作用。本文研究该菌的生物学特性及其拮抗物质分离纯化。通过形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析,将B21菌株鉴定为枯草芽孢杆菌。该菌株能在pH 4.0~10.0和10℃~49℃范围内生长,最适生长pH 6.0~8.0,最适生长温度为34℃,能利用蔗糖、葡萄糖、乳糖、棉子糖和麦芽糖作为碳源,能利用蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和干酪素作为氮源。B21菌株产生拮抗物质最佳培养条件为:以蔗糖为碳源、酵母浸膏和干酪素为氮源、温度为34~37℃、初始pH值为7.0、培养时间为7d。通过盐析、DEAE-52阴离子交换层析和Sephadex G-75过滤层析,将B21菌株分泌的拮抗物质纯化到薄层层析斑点纯。超滤离心法测定结果表明,在B21菌株分泌的物质中,分子量小于30kD和大于50kD的物质没有拮抗活性。采用SDS-PAGE进行分子量测定,初步确定已纯化的B21菌株拮抗物质的分子量大约为40000D。B21菌株粗拮抗物质经100℃处理20min后,其拮抗活性显著下降,120℃处理20min后完全丧失拮抗活性;B21菌株拮抗粗提物对胰蛋白酶和胃蛋白酶基本稳定,对蛋白酶K部分敏感;作用活性pH值范围在4.0~10.0之间。通过显微观察,B21菌株的拮抗物质可使玉米青枯病菌的孢子萌发异常、菌丝变形,原生质外溢。拮抗物质对茄青枯拉尔氏菌(Ralstonia solanacearum E.F.Smith)、罗汉果青枯病菌(Ralstonia solanacearum E.F.Smith)、柑橘溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri)、水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryazepv.oryaze)、水稻细菌性条斑病[Xanthomonas oryaze pv.oryaze(Fang et al.)Swings et al.]、稻瘟病菌[Magnaporthe grisea (Hebert) Barr.]、玉米大斑病菌[Exserohilum turcicum(Pass.) Lenonard & Suggs]、玉米小斑病菌[Bipolaris maydis(Nishik.& Miyabe)shoem.]、白菜黑斑病菌[Alternariabrassicae(Berk.)Sacc.]、香蕉大灰斑病菌[Curvularia lunata(Walker)Boed.)]、香蕉叶缘枯斑菌(Alternaria musae Bour.et Bat)、香蕉褐缘灰斑病菌(Cercospora musae Zimm.)和香蕉煤纹病菌[Helminthosporium torulosum(Syd)Ashby]、八角炭疽病菌(Colletotrichum coccdes(Wall)Hughes& Colletotrichum sp.)、玉米青枯病菌(Fusarium moniliforme Sheld.)、水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani Kuhn)和茉莉白绢病菌(Sclerotium rolfsii Sacc.)生长具有抑制作用。
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