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研究目的：通过免疫磁珠分选(MACS)结合无血清培养法从人胃癌BGC823/5-Fu细胞中得到CD44(+)干样细胞。观察健脾养胃方含药血清对CD44(+)干样细胞分化的影响,探讨健脾养胃方治疗胃恶性肿瘤的可能机制,以期为临床提供高效、低毒、作用广泛的抗肿瘤中成药并为探索中医药抗肿瘤提供新思路。研究方法：采用免疫磁珠分选结合无血清培养法分离出BGC823/5-Fu细胞株中的CD44阳性细胞,置于超低粘附六孔板内,培养于根据特定配方配置好的无血清培养基中。通过观察细胞生长形态、小牛血清诱导分化和流式细胞术检测CD44表达量对分选出来的CD44(+)BGC823/5-Fu细胞进行简单鉴定。用MTT法明确健脾养胃方含药血清对BGC823/5-Fu细胞生长增殖的作用。流式检测分离所得细胞经各浓度含药血清(灌药浓度分别为1.9、1.4、0.9g/ml)和空白血清(灌生理盐水)培养后的CD44阳性率,Western blot实验检测Nanog、Sox2、Oct4蛋白的表达情况。比较分离所得细胞经各浓度含药血清与空白血清诱导分化后CD44阳性表达率及干性相关蛋白Nanog、Sox2、Oct4的表达情况。研究结果：①分选前BGC823/5-Fu细胞呈梭状,长短不一,贴壁生长,而分选出的CD44(+)细胞为圆形,呈团状生长。将CD44(+)BGC823/5-Fu和CD44(-)BGC823/5-Fu均置于超低黏附6孔板中悬浮培养24h,CD44(+)细胞群生长呈团状,而CD44(-)细胞群生长呈放射状或链状。将CD44(+)BGC823/5-Fu和CD44(-)BGC823/5-Fu均置于普通大皿中培养10天后,CD44(+)细胞成球,而CD44(-)细胞贴壁生长。②流式细胞术检测示,经磁珠分选结合无血清培养后的细胞群CD44阳性率高达95.9%；诱导分化实验后,通过细胞形态观察发现,CD44(+)细胞是有分化能力的。③用高、中、低浓度组含药血清与空白血清分别培养BGC823/5-Fu细胞24小时后,细胞活性出现差别,表现为健脾养胃方含药血清对细胞增殖有抑制作用,其抑制率与空白血清组比较有差异(P<0.05),且其抑制率量效之间呈正比。④CD44(+)胃癌干细胞分别于高、中、低浓度组含药血清培养液中培养48小时后,与空白血清组相比,CD44的表达降低,组别之间比较有差异(P<0.05),且呈量效性关系；高、中浓度组含药血清培养CD44(+)胃癌干细胞72小时后,与低浓度含药血清组、空白血清组比较,细胞干性相关蛋白Nanog、Oct-4和Sox2表达明显下降。空白血清组与无血清培养比较下降不明显。研究结论：免疫磁珠分选法结合无血清培养可以分离得到具有肿瘤干样细胞特征的CD44(+)BGC823/5-Fu细胞。健脾养胃方含药血清有抗肿瘤作用,并且可以促进CD44(+)胃癌干样细胞的分化。