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目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)作为糖尿病最常见的微血管并发症之一,能够引发终末期肾病(ESRD),对糖尿病患者的健康造成严重危害,是糖尿病患者死亡的主要原因。因此,积极有效地防治糖尿病肾病意义重大。导师张庚良教授根据健脾补肾活血法进行组方,在保护肾脏及延缓其病程进展方面取得显著的效果。本实验通过腹腔注射链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型,后予以药物干预,观察健脾补肾活血法对糖尿病大鼠的一般情况、血生化各指标、肾组织病理形态学、肾脏肥大指数、24h尿白蛋白排泄率及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响,探讨本方在糖尿病肾病肾脏保护方面的作用机制。方法:选用清洁级健康雄性SD大鼠,体重约230~250g,共58只,普通饲料适应性喂养1周,随机分为正常对照组(N组)10只,另外48只大鼠用于复制建立糖尿病模型。按55mg/kg体重计算,予以1%的链脲佐菌素枸橼酸缓冲液(缓冲液浓度为0.1mmol/L,p H值为4.5)左下腹腔内一次性注射,N组予以等量的1%柠檬酸缓冲液左下腹腔内一次性注射。72小时后于大鼠尾尖取血,若血糖值≥16.7mmol/L,并且大鼠饮水量及排尿量均明显增多,则表明造模成功。将成模的大鼠随机分为模型对照组(M组)、健脾补肾活血法组(H组)、厄贝沙坦组(W组)、健脾补肾活血法联合厄贝沙坦组(H+W组),每组为12只。造模成功1周后,按照成人剂量的10倍对H组、W组及H+W组予以灌胃给药。H组予本方每日10ml/kg(相当于生药35.3g/kg)体重灌胃,W组予厄贝沙坦片混悬液(阿拉伯树胶制为混悬液)每日10ml/kg(相当于原药2.5mg/ml)体重灌胃,H+W组每日上午予与H组同等剂量的健脾补肾活血中药,每日下午予与W组同等剂量的厄贝沙坦,N组和M组每日给予同等体积的生理盐水灌胃。连续灌胃8周。第8周末,用代谢笼收集24h尿液并记录尿量,测定24h尿白蛋白排泄率(UAER),禁食不禁水12小时,按20mg/kg体重计算,予2%戊巴比妥钠腹腔注射进行麻醉,取大鼠左侧股动脉血,用于测大鼠血葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐及肿瘤坏死因子-α和单核细胞趋化蛋白-1,迅速取出双肾制作标本,光镜下观察肾组织病理形态学变化,并测定肾脏肥大指数,免疫组化法测定肿瘤坏死因子-α和单核细胞趋化蛋白-1在肾组织的表达情况。结果:1一般情况观察N组的大鼠体重增加,一般状态良好,毛皮有光泽,反应敏捷,动作自如,进食及饮水正常,排便排尿正常。M组的大鼠消瘦,精神萎靡,毛色杂乱枯黄,活动度和灵敏度下降,多饮,多食,多尿,大便不成形。随实验进行过程中,个别大鼠出现糖尿病并发症如足部溃烂、四肢水肿。经药物治疗后,与M组比较,三个治疗组大鼠的临床表现均有不同程度改善。实验期间,N组大鼠由于互相撕咬致皮肤溃烂感染死亡1只;M组大鼠死亡1只,考虑为行动迟缓、进食差所致;W组因灌胃操作失误引起窒息死亡1只。2血糖及血脂的变化与N组相比,M组、H组、W组、H+W组大鼠血糖、血脂均明显升高,有显著性差异(P<0.05);与M组相比,H组和H+W组大鼠血糖、血脂水平显著降低,有统计学差异(P<0.05);与M组相比,W组大鼠血糖、血脂下降不明显,无统计学差异(P>0.05)。3肾脏肥大指数及24小时尿白蛋白排泄率的变化与N组相比,M组与三个治疗组大鼠的肾脏肥大指数及24h尿白蛋白排泄率均明显升高,有统计学差异(P<0.05);与M组相比,三个治疗组大鼠的肾脏肥大指数及24h尿白蛋白排泄率均有所降低,有显著性差异(P<0.05);H+W组大鼠的肾脏肥大指数及24h尿白蛋白排泄率均低于H组和W组,有显著性差异(P<0.05)。4肾功能的变化与N组相比,M组和三个治疗组大鼠的尿素氮、肌酐均升高,有显著性差异(P<0.05);三个治疗组与M组相比,均可使尿素氮、肌酐降低,有显著性差异(P<0.05);与H组及W组比较,H+W组大鼠的尿素氮、肌酐水平降低明显,有显著性差异(P<0.05)。5肾脏组织病理形态学的变化N组肾单位清晰完整,未见增大的肾小球,无肾小球基底膜增厚及系膜细胞增生,无炎性细胞浸润;M组肾小球体积明显增大,基底膜增厚,系膜区增宽,部分肾小管上皮细胞显示空泡状或颗粒状变性,可见炎性细胞浸润。与M组相比,H组、W组及H+W组大鼠肾脏病理损伤均有不同程度的减轻,以H+W组最明显。6肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响TNF-α和MCP-1抗原免疫组化显示为棕黄色颗粒状阳性反应物,主要存在于肾组织肾小管上皮细胞和肾间质细胞胞浆内。N组大鼠TNF-α和MCP-1没有表达或呈弱阳性表达。M组大鼠TNF-α和MCP-1显示强阳性表达,主要集中在肾小管上皮细胞内,与N组相比较有显著性差异(P<0.05)。与M组相比,三个治疗组大鼠TNF-α和MCP-1均有较低的表达,有显著性差异(P<0.05),其中以H+W组最为明显(P<0.05)。用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)。与N组相比,M组及三个治疗组大鼠的TNF-α和MCP-1均升高,有显著性差异(P<0.05);与M组相比,H组、W组、H+W组大鼠的TNF-α和MCP-1均较低,有统计学差异(P<0.05);与H组及W组比较,H+W组大鼠的TNF-α和MCP-1均较低,有显著性差异(P<0.05)。结论:1以健脾补肾活血法组方可改善糖尿病大鼠的一般状况,降低血糖,降低总胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐,减少尿蛋白排出,恢复糖尿病肾病大鼠肥大的肾脏,改善其病理形态。2以健脾补肾活血法组方能抑制TNF-α和MCP-1在糖尿病大鼠肾组织和血清中的表达,降低肾脏炎症反应,具有一定肾脏保护作用,从而发挥预防和治疗糖尿病肾病的作用。