鳞翅目昆虫与高等动物一样,本身可以抵御外来异物入侵,具有极强的先天免疫力。免疫系统包括体液免疫和细胞免疫,在细胞免疫系统中,通过血淋巴中的血浆细胞吞噬外来异物;而在体液免疫系统中,外来异物刺激可以促进各种与免疫有关的大分子物质的产生,这些大分子物质包括溶菌酶、抗菌肽和抗菌蛋白等。抗菌蛋白对多种微生物具有着极强的杀伤能力,由于昆虫类的抗菌蛋白具有广谱抗菌能力和分子量小等优点,所以抗菌蛋白的研究对于昆虫防御系统的研究和抗菌药物的研究均有着重要的意义。6-Tox是一种只存在于鳞翅目昆虫中的具有免疫功能的蛋白质,当外来生物侵入时分泌表达。本研究设计合成特异性Real-Time PCR引物,通过枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli Top10)、真菌(S. cerevisiae W303-1A)以及柞蚕杆状病毒(Antheraea pernyi nuclear polyhedrosis virus)对柞蚕滞育蛹进行诱导,采用实时定量PCR技术,对不同诱导条件下的不同组织中的6-Tox基因表达差异进行研究。根据柞蚕6-Tox基因序列,设计特异性引物,以大肠杆菌诱导的柞蚕滞育蛹脂肪体RNA为模板,反转录后进行PCR扩增得到目的片段,并对6-Tox氨基酸序列进行生物学分析。构建了6-Tox融合蛋白表达载体pGEX-6P-1-6-Tox,以大肠杆菌BL21为宿主菌对目的基因进行表达。通过对诱导温度、诱导剂浓度和诱导时间进行实验,确定了6-Tox基因在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,菌体经超声破碎处理后,通过亲和层析法对6-Tox蛋白进行了纯化。本研究实现了GST-6-Tox融合蛋白在大肠杆菌BL21中的高效可溶性表达,经亲和层析分离纯化得到GST-6-Tox融合蛋白,为柞蚕抗菌蛋白6-Tox的研究及应用奠定了良好基础。