目的：将猪皮经酶解制备促创面愈合活性肽；对其促创面愈合活性部位或单体进行分离纯化和鉴定，对其促愈合机理进行初步研究。方法：采用单因素考察结合正交试验优选猪皮仿生酶解工艺；以主要药效学指标考察超滤工艺；以脱盐率、肽收率为指标考察电渗析脱盐工艺；以总肽含量为指标正交优选喷雾干燥工艺；以大孔吸附树脂DA201-C及葡聚糖凝胶G-25对猪皮胶原肽进行分离纯化；以ESI-Q-TOF2质谱仪对活性部位进行肽序列分析；对猪皮胶原肽中的甘氨酸、脯氨酸进行定性鉴别；柱前衍生化法测定猪皮胶原肽中羟脯氨酸含量；以免疫组织化学法考察其对大鼠皮肤创面修复的促进作用。结果：加鲜猪皮重量1.5%的胃蛋白酶，调pH值至1.5～2.0，40℃保温酶解2h，调pH值至7.5～8.0后加入药材重量2.0%的胰蛋白酶，40℃保温酶解4h；酶解液经截留分子量为3KDa的中空纤维超滤膜超滤，超滤液过电渗析器除盐，脱盐率达88%；脱盐肽溶液减压浓缩至相对密度1.10～1.15，以进风温度160℃，出风温度80℃进行喷雾干燥，得到猪皮胶原肽。将胶原肽溶液上DA201-C，收集水洗脱部位，冷冻干燥；上葡聚糖凝胶G-25，收集第65～70管洗脱液，冷冻干燥。测定主要活性部分相对分子质量在800～2000Da之间，测定其中两个肽序列；猪皮胶原肽供试品色谱中在与对照品相应的位置上显相同颜色的斑点；羟脯氨酸含量大于10.0%；能有效促进碱性成纤维细胞增殖，可促进大鼠创伤组织碱性成纤维细胞生长因子的表达。结论：猪皮促创伤愈合活性肽制备分离及纯化工艺稳定，能通过促进相关因子的表达促进创面愈合。