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人口的日益增长和现代工业化进程的加快，使得油脂需求量的增加与自然资源严重短缺的矛盾愈发尖锐，能源危机以及由此带来的环境污染已经成为今后持续困扰人类健康、生存与发展的重要问题，微生物油脂成为一种应用前景广阔的新型油脂资源。纤维素是地球上最丰富的可再生生物聚合物，80%以上尚未被利用或未被合理利用。选育利用纤维素为碳源生产微生物油脂的菌株，不但可以降低油脂生产成本，缓解动植物油脂紧缺的局面，而且可以实现废弃物的资源再利用，有利于环境保护，具有重要的实践意义和应用价值。桑树内生菜豆壳球孢菌MOD-1（Mulberry endophyte Macrophomina phaseolinaMOD-1）是本实验室从健康桑树根系中分离得到的一株产油脂能力较强、但降解纤维素能力差的内生真菌。绿色木霉TP4、T44及长柄木霉TL是三株降解纤维素能力强、但不产油脂的菌株。本研究分别对MOD-1、T44、TP4及TL进行了原生质体制备和再生条件的优化，并进一步将MOD-1与三株木霉菌分别进行了原生质体融合，使其融合子获得双亲的优良性状，达到高效利用纤维素发酵产油脂的目的。主要研究结果如下：1.亲本原生质体制备及再生的条件优化通过单因素试验、正交试验及中心组合试验（Central Composite Design，CCD）对MOD-1原生质体制备条件进行优化，确定了MOD-1原生质体制备的最佳条件为：采用浓度0.66mol/L的氯化钾作稳渗剂，培养44.58h的MOD-1菌体在20mg/mL纤维素酶+20mg/mL溶菌酶+5mg/mL蜗牛酶的混合酶液中酶解4h，酶解温度为30C，原生质体产量达到7.02×10~6个/mL，再生培养后再生率达到4.90%。通过单因素试验和正交试验分别对TP4、T44、TL原生质体制备条件进行优化，确定了TP4原生质体制备的最佳条件为：采用浓度为0.7mol/L氯化钾作稳渗剂，培养48h的菌体在15mg/mL纤维素酶+15mg/mL溶菌酶+20mg/mL蜗牛酶的混合酶液中酶解3h，酶解温度为30C，原生质体产量达到4.43×10~6个/mL，再生培养后再生率达到3.26%。T44原生质体制备的最佳条件为：采用浓度为0.7mol/L氯化钾作稳渗剂，培养36h的T44菌体在15mg/mL纤维素酶+10mg/mL溶菌酶+25mg/mL蜗牛酶的混合酶液中酶解3h，酶解温度为30C，原生质体产量达到6.35×10~6个/mL，再生培养后再生率达到4.51%。TL原生质体制备的最佳条件：采用浓度为0.7mol/L氯化钾作稳渗剂，培养36h的菌体在20mg/mL纤维素酶+15mg/mL溶菌酶+15mg/mL蜗牛酶的混合酶液中酶解4h，酶解温度为30C，原生质体产量达到4.35×10~6个/mL，再生培养后再生率达到4.12%。2.亲本原生质体灭活条件的优化分别用紫外灭活（30W紫外灯距离10cm处照射）和热灭活（55C恒温水浴锅中加热）两种方式对MOD-1、TP4、T44、TL四株亲本原生质体进行灭活。结果发现MOD-1紫外照射10min或加热15min；TP4紫外照射25min或加热20min；T44紫外照射25min或加热25min； TL紫外照射30min或加热20min，各亲本原生质体的灭活率均达到100%。3.融合菌株的获得将灭活的MOD-1原生质体分别与不同方式灭活的TP4、T44、TL原生质体进行融合。根据融合子的菌落、孢子形态特征等进行初筛，以纤维素钠作为唯一碳源进行发酵的菌体油脂产量为指标进行复筛，得到1株具有MOD-1与TP4双亲优良性状的融合菌株MP-1，其油脂产量、含量分别达到0.0824g/L、14.46%。继代培养5代后，遗传稳定性分别达到92.84%和95.00%。RAPD分析结果进一步证明了该融合菌株为杂合二倍体，在DNA水平上更接近于MOD-1。