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本研究主要包括以下三个方面的内容:
一、SARS-CoVN蛋白单克隆抗体的制备及其性质分析。我们用基因重组SARS-CoVN蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,用甲基纤维素半固体培养基培养杂交瘤细胞,制备单克隆抗体。通过免疫双向扩散、间接ELISA、间接免疫荧光、和WesternBlot等方法鉴定抗体的特性。融合后共挑出576个克隆,得到抗基因重组SARS-CoVN蛋白单克隆抗体19个,阳性克隆率为3.3%。19株单抗中有15株能稳定分泌抗体,其中10株与灭活的SARS-CoV(北京GBI生物技术有限公司试剂盒)呈阳性反应。该10株单抗的相对亲和力在1.1×108~8.9×109M-1之间。10株中有1株为IgG2b、1株为IgG3,其余均为IgG1。10株单抗中有8株与12种肺炎相关的病原体无交叉反应,1株与甲型、乙型流感病毒,副流感病毒有交叉反应,1株与甲型、乙型流感病毒有交叉反应。最终得到8株特异性好、亲和性高且与其它相关病原体无交叉反应的单克隆抗体。
二、SARS-CoVS蛋白单克隆抗体的制备。
三、用抗SARS-CoVN蛋白单克隆抗体初步建立检测SARS-CoV的双抗体夹心ELISA方法。
本文采用甲基纤维素半固体培养基制备抗SARS-CoVN、S蛋白的单克隆抗体,成功获得了抗SARS-CoVN蛋白的单抗,并建立了检测SARS-CoV的双抗体夹心ELISA方法。本研究所制备的单克隆抗体可以为SARS-CoV的基础与临床研究提供有力的工具,建立的双抗体夹心ELISA方法有望在患者感染初期进行检测,以利尽早地采取预防和治疗措施。