论文部分内容阅读
第一部分临床水平TRPV1/TRPA1异聚体对子宫内膜异位症疼痛的影响研究背景子宫内膜异位症是一种良性的女性慢性疾病,其发病的确切机制尚不清楚。子宫内膜异位症常见的症状为疼痛。已有研究证实TRPV1/TRPA1参与疼痛机制,但TRPV1/TRPA1异聚体对子宫内膜异位症疼痛的影响作用仍不明确。研究目的探讨TRPV1/TRPA1异聚体与子宫内膜异位症患者疼痛级别的相关性。研究方法收集28例确诊患有子宫内膜异位症患者的病变组织,根据NRS（Numerical rating scale）疼痛评估量表（0无疼痛、1～3轻、4～6中、7～10重度）分为不同疼痛等级。正常子宫内膜组织来源于子宫腺肌症行子宫切除术的患者。荧光定量PCR检测TRPV1/TRPA1 m RNA表达水平;免疫组化检测TRPV1/TRPA1蛋白表达;免疫荧光检测TRPV1/TRPA1异聚体表达和定位。结果相比正常组织,TRPV1/TRPA1 m RNA、蛋白表达以及TRPV1/TRPA1异聚体的表达随子宫内膜异位症疼痛评分的升高而增加;与疼痛评分呈正相关。结论临床样本检测结果显示:TRPV1/TRPA1异聚体形成可能与子宫内膜异位症疼痛呈正相关。第二部分细胞水平TRPV1/TRPA1异聚体对LPS诱导的人子宫异位内膜上皮细胞的影响研究背景子宫内膜异位症疼痛与子宫内膜间质及内皮细胞炎性微环境相关;与炎症诱导的外周、中枢神经敏化相关。TRPV1/TRPA1表达影响神经的敏化。子宫内膜异位症疼痛的确切机制尚待深入研究。TRPV1/TRPA1异聚体与子宫内膜细胞炎性微环境的作用尚不明确。研究目的LPS诱导人子宫内膜细胞建立炎症模型,探讨炎症条件下TRPV1/TRPA1 m RNA、蛋白表达以及TRPV1/TRPA1异聚体的变化。研究方法LPS诱导人子宫内膜异位症细胞,联合TRPA1激动剂肉桂醛、TRPA1抑制剂HC030031、TGFβ1干预细胞进行比较研究。EDU检测细胞增殖;ELISA检测细胞上清IL-1β,IL-6,TNF-α和PGE2的含量;q PCR,Western blot检测TRPV1/TRPA1m RNA、蛋白表达;免疫荧光检测TRPV1/TRPA1异聚体共定位。结果与溶剂处理的细胞相比（Control）,肉桂醛、HC030031和TGFβ1对h EM15A的细胞增殖影响不大,而LPS有诱导细胞增殖下降的趋势。值得注意的是,肉桂醛和HC030031在LPS诱导的h EM15A细胞增殖中都没有更突出的作用。Elisa检测结果显示,LPS诱导h EM15A细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α和PGE2浓度升高,肉桂醛、HC030031和TGFβ1对h EM15A细胞分泌或LPS诱导的炎症相关因子几乎无影响。Western blotting结果显示,肉桂醛、TGFβ1和LPS均诱导了TRPV1和TRPA1蛋白的表达,且LPS对TRPV1/TRPA1表达的影响最为显著。肉桂醛和HC030031可以减弱而不是逆转LPS对TRPV1/TRPA1蛋白表达的影响。h EM15A细胞免疫荧光染色结果显示,LPS诱导TRPV1/TRPA1异构体表达上调,是肉桂醛而不是TGFβ1能增强h EM15A细胞中TRPV1/TRPA1异构体的LPS诱导,HC030031能减弱LPS的作用。结论LPS诱导人子宫内膜异位症细胞中TRPV1/TRPA1异聚体增加;TRPV1/TRPA1异聚体的增加重人子宫内膜异位症细胞的炎症微环境。TRPV1/TRPA1异聚体与炎症微环境间存在反馈作用。第三部分动物水平TRPV1/TRPA1异聚体对子宫内膜异位症小鼠疼痛的影响研究背景子宫内膜异位症疼痛与炎症及激素相关。TRPV1/TRPA1相关离子通道在激素诱导的子宫内膜异位症疼痛中作用有待进一步的研究。研究目的动物水平探讨TRPV1/TRPA1异聚体对子宫内膜异位症小鼠疼痛的影响作用。研究方法植入法建立小鼠子宫内膜异位症模型;联合TRPA1激动剂肉桂醛,TRPA1抑制剂HC030031干预。注射缩宫素进行疼痛行为学实验;ELISA检测动物血清及腹腔清洗液中IL-1β,IL-6,TNF-α和PGE2的含量;q PCR,Western blot检测TRPV1/TRPA1m RNA、蛋白表达;免疫荧光检测TRPV1/TRPA1异聚体共定位。结果缩宫素诱导的模型小鼠扭动频率显著增加,肉桂醛增加小鼠的扭动频率;HC030031减少了小鼠的扭动频率。与各实验组间扭体实验结果的趋势相对应,肉桂醛干预组子宫内膜异位症小鼠异位子宫内膜组织中TRPV1及TRPA1蛋白含量最高;与溶剂对照子宫内膜异位症小鼠相比,HC030031治疗组小鼠和假手术组小鼠的TRPV1/TRPA1蛋白表达最低。与TRPV1/TRPA1表达检测检测结果类似,缩宫素诱导的模型小鼠血清及腹腔清洗液中IL-1β,IL-6,TNF-α和PGE2的含量显著增加,肉桂醛进一步增加小鼠血清及腹腔清洗液中IL-1β,IL-6,TNF-α和PGE2的含量;HC030031减少了小鼠血清及腹腔清洗液中IL-1β,IL-6,TNF-α和PGE2的含量。结论动物水平研究结果提示TRPV1/TRPA1异聚体与子宫内膜异位症小鼠疼痛呈正相关;与小鼠血清及腹腔清洗液中IL-1β,IL-6,TNF-α和PGE2的变化正相关。