紫菜提取物及其抗紫外辐射活性的研究

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目的:1、以紫菜为原料,制备藻胆蛋白、多糖、类菌胞素氨基酸(MAAs)等物质。2、研究藻胆蛋白、多糖、类菌胞素氨基酸对体外培养的小鼠成纤维细胞(NIH3T3)因紫外辐射损伤的修复作用。探讨紫菜提取物在紫外辐射方面的应用前景。方法:1、采用超声波破碎的方法同时提取紫菜中的藻胆蛋白和多糖。采用水提的方法从超声提取的滤渣中制备MAAs化合物。2、采用盐析法和层析法对藻胆蛋白粗提液进行分离纯化,并且比较DEAE-纤维素柱层析和羟基磷灰石(HAP)柱层析的纯化效果。3、建立UVA辐射损伤NIH3T3的细胞模型。MTT法检测藻胆蛋白、多糖、类菌胞素氨基酸对NIH3T3细胞的增殖作用以及紫外保护作用。结果:1、通过正交试验得到超声波破碎提取藻胆蛋白和多糖的较优提取工艺条件为:料液比15mg/ml、超声工作时间4s、超声间隙时间3s、超声提取90min,总蛋白的提取得率为14.4%,多糖提取得率为33.2%。2、通过紫外光谱扫描确定提取液的紫外最大吸收波长为332nm,并用液相色谱和液质联用仪分析鉴定了该物质是MAAs化合物。3、采用盐析法对藻胆蛋白粗提液进行分离。先用25%饱和度的硫酸铵除去杂蛋白,然后用60%饱和度的硫酸铵盐析沉淀藻胆蛋白,接着用Sephadex G-25层析柱对藻胆蛋白的盐析液脱盐处理。分别用DEAE-纤维素柱层析和HAP柱层析对藻胆蛋白进行了纯化,DEAE-纤维素柱层析得到的样品纯度(AmaxA280)为1.0~1.5;HAP柱层析得到的纯度(AmaxA280)为2.15。将一次层析得到的样品再分别用HAP柱层析进行二次层析,经二次层析的样品的纯度均有所提高。4、紫菜提取物对NIH3T3细胞无明显的细胞毒性,均有显著的增殖效果。NIH3T3细胞经紫外辐射后加入紫菜提取物,与对照组相比,细胞的存活率有显著性的差异。结论:UVA能抑制NIH3T3细胞的生长,藻胆蛋白、多糖、类菌胞素氨基酸等紫菜提取物对体外培养的小鼠成纤维细胞因紫外辐射损伤具有保护修复的作用。
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