【摘 要】
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病原真菌在长期的进化过程中形成了多样的感染机制和生存策略。白念珠菌是人类机会性致病真菌,它可以形成多种不同的细胞形态,并且各形态间可以相互转换,已证实保守的cAMP/PKA信
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病原真菌在长期的进化过程中形成了多样的感染机制和生存策略。白念珠菌是人类机会性致病真菌,它可以形成多种不同的细胞形态,并且各形态间可以相互转换,已证实保守的cAMP/PKA信号通路在调控形态转换的过程中发挥了重要作用。蛋白激酶A(PKA)是蛋白激酶(PKs)家族的重要成员,蛋白激酶(PKs)通过可逆的催化蛋白质的磷酸化来调控细胞内各种代谢和生物学功能。本文主要研究白念珠菌PKA调节亚基Bcy1对细胞生长和形态转换等方面的调控作用。 保守的cAMP依赖性蛋白激酶A主要由调节亚基和催化亚基组成,是cAMP信号途径的核心组成部分。在白念珠菌中,PKA的调节亚基Bcy1在调控细胞分化和死亡过程中扮演着至关重要的角色。长期以来Bcy1被认为是白念珠菌的必需基因。在本课题的研究中,我们成功地构建了bcy1/bcy1突变株,意外地发现该基因并非白念珠菌生长所必需的。敲除BCY1引发了多种形态变化,可同时促进菌丝发育和opaque细胞形成,产生菌丝型和光滑型两种形态的菌落,且这两种形态可以自发的相互转换。相比于光滑型菌落,菌丝型菌落在许多培养基上长势良好,且存活率要高。此外,敲除BCY1在含有GlcNAc的培养基中white向opaque转换频率显著提高。本研究中bcy1/bcy1突变株的获得,为研究白念珠菌cAMP-PKA信号通路的生物学功能提供了新线索。 在有性生殖中,基因重组能增加子代基因型的多样性,增强其适应自然选择的能力。白念珠菌没有典型的有性生殖过程,但它可以通过准性生殖完成交配,从而加速进化的进程。为了实现交配,白念珠菌首先由MTL杂合型变为纯合型,然后纯合型white再进一步变为opaque进而完成交配过程。MAPK信号途径和cAMP/PKA信号途径均能调控菌丝形成和white-opaque转换。其中,MAPK信号途径还调控着白念珠菌的交配。本研究发现敲除BCY1促进white向opaque形态转换,但opaque形态的bcy1/bcy1突变株交配效率明显低于野生型菌株,说明cAMP/PKA信号途径除了调控white-opaque形态转换,可能也调控着白念珠菌的交配。 综上所述,本课题为Bcy1功能的研究提供了新视角,该基因参与白念珠菌菌丝形成、碳源利用和white-opaque转换等生理过程。这些实验结果进一步证实了cAMP-PKA途径的保守性,以及其在调控白念珠菌各种生物学特性中的核心地位。许多与该通路相关的功能基因有待发掘,对这些基因功能的探索将有助于我们进一步了解cAMP-PKA信号通路,同时为抗真菌药物的研发提供理论依据。
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