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目的明确KOA滑膜组织中是否存在巨噬细胞焦亡现象,寻找它与滑膜炎症、软骨退变、痛敏状态的内在联系;基于滑膜巨噬细胞焦亡/TRPs信号通路研究“易层”贴敷有效抑制KOA疼痛的疗效机制。方法(1)建立KOA大鼠模型,运用HE染色、免疫荧光、Western Blot等实验方法,明确滑膜巨噬细胞是否发生焦亡及其与滑膜炎症、软骨退变的关系;(2)建立KOA大鼠模型,通过检测冷痛敏和机械痛敏参数、背根神经节组织TRPs通道蛋白和基因的表达,明确滑膜巨噬细胞焦亡对背根神经节TRPs蛋白表达及痛敏的干预作用;(3)体外构建巨噬细胞焦亡模型,运用钙离子成像、Western Blot、PCR等实验方法,探讨巨噬细胞焦亡对神经元细胞TRPs通道蛋白表达和功能的干预作用;(4)建立KOA大鼠模型,通过检测冷痛敏和机械痛敏参数、背根神经节组织TRPs通道蛋白和基因的表达,探索“易层”贴敷缓解KOA疼痛的疗效机制;(5)建立KOA大鼠模型,运用HE染色、免疫荧光、Western Blot等实验方法,观察“易层”贴敷对滑膜组织巨噬细胞焦亡的干预作用。结果(1)KOA模型组大鼠出现典型的滑膜炎症、软骨退变表现,同时滑膜组织中存在巨噬细胞焦亡相关蛋白的高表达;运用巨噬细胞特异性caspase-1低表达腺相关病毒抑制巨噬细胞焦亡,可以显著减轻滑膜炎症和软骨退变;(2)KOA模型组大鼠表现出典型的冷痛敏和机械痛敏状态;巨噬细胞焦亡被抑制后,大鼠痛敏状态显著改善,冷刺激缩足潜伏期较模型组延长,机械刺激缩足阈值较模型组显著升高,背根神经节组织TRPA1、TRPM8、TRPV4蛋白和基因表达较模型组均有所下调;(3)体外运用LPS/ATP干预巨噬细胞,成功构建细胞焦亡模型;使用巨噬细胞的培养上清液干预神经元细胞,观察其对神经元细胞膜TRPs通道的干预作用。发现巨噬细胞焦亡产物能够显著上调TRPs蛋白和基因的表达,焦亡被抑制后此作用被消除;通过神经元钙离子成像技术观察细胞内钙离子浓度,发现巨噬细胞焦亡产物能够显著升高细胞内的钙离子浓度,抑制焦亡能够降低细胞内的钙离子浓度;(4)“易层”贴敷可改善KOA大鼠的冷痛敏和机械痛敏状态,延长冷刺激缩足潜伏期,升高机械刺激缩足阈值;“易层”贴敷干预可降低KOA大鼠背根神经节组织TRPs通道蛋白的表达;(5)“易层”贴敷可下调KOA大鼠滑膜组织中的巨噬细胞焦亡相关蛋白的高表达,同时改善滑膜炎症,降低血清中促炎因子水平。结论(1)KOA滑膜组织存在巨噬细胞焦亡,推动滑膜炎症、软骨破坏;(2)KOA滑膜组织巨噬细胞焦亡,释放促炎因子,激活TRPs通道,参与构建冷痛敏和机械痛敏状态;(3)“易层”贴敷可有效改善KOA的冷痛敏、机械痛敏状态;(4)“易层”贴敷通过干预巨噬细胞焦亡/TRPs信号通路,发挥抑制KOA疼痛的治疗效应。