山东省兔肠道原虫分子流行病学研究及基因型鉴定

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蓝氏贾第虫(Giardia lamblia)和芽囊原虫(Blastocystis)是人和大多数动物重要的人兽共患机会性肠道原虫。艾美耳球虫(Eimeria spp.)是大多数动物包括兔子在内的重要机会性肠道原虫,这3种肠道原虫的流行呈全球分布。肠道原虫的卵囊、包囊及孢子在外界环境中能够长期存在。人或动物感染后,会导致机体出现不同程度的临床症状,如精神萎靡、机体消瘦和胃肠道疾病等。兔子一旦感染这3种肠道原虫,可引起兔发育迟缓、生产性能降低和营养不良等疾病,甚至造成死亡,严重威胁我国养兔业的健康发展。然而,目前关于这3种肠道原虫感染兔的流行病学调查在国内寥寥可数。因此,为评估养兔业肠道原虫的流行情况,本研究对山东省养兔业发达的两个城市(日照市、威海市)的兔肠道原虫进行了虫种/基因型鉴定和流行病学调查。本研究从山东省收集616份兔粪便样品,其中日照市490份,威海市126份。通过巢式PCR扩增蓝氏贾第虫的bg(β-贾第素)基因位点、gdh(谷氨酸脱氢酶)基因位点和tpi(磷酸丙糖异构酶)基因位点,鉴定兔蓝氏贾第虫的感染率和基因型。检测发现有69份样品呈蓝氏贾第虫阳性,感染率为11.2%(69/616)。其中日照市的兔蓝氏贾第虫感染率为8.4%(41/490),威海市的感染率为22.2%(28/126)。在3个品种的兔中,Tolai野兔的蓝氏贾第虫感染率最高为23.1%(51/221),其次是新西兰大白兔的感染率为7.3%(15/207)和长毛兔的感染率为1.6%(3/188)。统计学分析显示,蓝氏贾第虫感染率在3个品种的兔中差异性显著(P<0.05)。通过序列分析,鉴定出兔蓝氏贾第虫的3种集聚体(Assemblages),分别为集聚体A、B和E,其中集聚体E是感染兔的优势基因型。本研究基于艾美耳属(Eimeria spp.)的第一内转录间隔区(first internal transcribed spacer,ITS1)序列进行PCR扩增。结果显示,山东省的兔艾美耳球虫感染率为20.0%(123/616),并鉴定出5种兔艾美耳球虫(包括肠艾美耳球虫、穿孔艾美耳球虫、大型艾美耳球虫、中型艾美耳球虫和无余艾美耳球虫),其中穿孔艾美耳球虫是感染兔的优势虫种。通过分析,发现阳性样品中存在多种艾美耳球虫混合感染的情况。统计学分析显示,兔艾美耳球虫感染率在兔的不同品种、地区、性别和饲养模式间差异性不显著(P>0.05)。本研究基于芽囊原虫的小亚基核糖体RNA(small subunit ribosomal RNA,SSU rRNA)序列,对兔粪便样品进行PCR扩增。检测发现有6份样品为芽囊原虫阳性,感染率为0.97%(6/616)。通过序列比对和系统发育进化分析,鉴定为芽囊原虫的人兽共患ST4基因亚型。统计学分析显示,芽囊原虫感染率在兔的不同品种、地区、性别和饲养模式间差异性不显著(P>0.05)。综上所述,本研究对我国山东省兔3种肠道原虫的感染率和虫种/基因型进行了研究分析,评估3种肠道原虫对兔健康的危害性及人兽共患的风险性。本研究在国内首次发现兔感染蓝氏贾第虫集聚体A,在山东省兔养殖场内首次发现芽囊原虫的流行,并鉴定为ST4基因亚型。通过分子流行病学研究分析可以观察这3种肠道原虫在我国养兔业的流行动态,能够准确追踪以及调查疾病的暴发,为预防和控制兔肠道原虫病的流行提供了参考信息。
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