厚荚相思离体培养及农杆菌介导遗传转化技术的研究

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本论文研究主要从继代增殖、愈伤组织的诱导和分化和无菌苗的生根壮苗及移栽三个方面对厚荚相思的离体培养体系进行研究,建立起较好的厚荚相思离体再生体系;从浸染时间、预培养时间和共培养时间对厚荚相思农杆菌介导遗传转化的影响进行了的研究,初步建立了厚荚相思的农杆菌介导遗传转化体系,为今后的厚荚相思离体培养与遗传转化研究提供重要的参考依据。试验结果表明:1、单独使用6-BA或KT对无菌苗的增殖效果不好,改良MS+6-BA0.5mg·L-1+KT1.0mg·L-1为适宜的继代增殖培养基,它能够使无菌苗在以较高的倍数增殖的同时保持旺盛的生长势,无菌苗的增殖倍数达3.4倍。2、2,4-D能有效地对厚荚相思不同的外植体部位诱导出愈伤组织,最高诱导率达100%;但诱导出的愈伤组织不能诱导分化形成不定芽。3、6-BA能有效地对厚荚相思不同的外植体部位诱导出愈伤组织,也能直接在外植体上诱导分化出不定芽。最适宜的不定芽诱导培养基为改良MS+6-BA2.5mg·L-1,不定芽的分化率最高,不同的外植体部位的分化率不同。最高的分化率为羽状复叶在此培养基上的直接分化,分化率为55.86%。4、NAA、IAA、IBA和ABT对厚荚相思无菌苗的生根均有较好的促进作用,MET不适合用于厚荚相思无菌苗的生根诱导。5、以不同的激素种类及其组合诱导生根所得组培生根苗的移栽成活率不同。以ABT0.5-2.0mg·L-1+MET0.5mg·L-1诱导生根的组培苗,在黄泥基质进行移栽的成活率最高,成活率达86.39%。6、不同的移栽基质对生根苗的移栽成活率有不同的影响。以黄泥:育苗介质(1∶1)进行移栽时移栽苗的成活率较高,成活率为84.36%。7、厚荚相思外植体对Km的有较高的基础抗性,抗性浓度为100~125mg·L-1。8、头孢噻肟钠浓度为300mg·L-1时可以完全抑制农杆菌At05、At06和A208SE的生长,但外植体保持较高的分化率。9、不同的菌株、菌液浓度、浸染时间、预培养和共培养对厚荚相思遗传转化GUS基因瞬时表达有不同的影响。
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