棉铃虫视觉基因的表达模式及功能研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Toowell_Star
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
棉铃虫Helicoverpa armigera(Hubner)寄主广泛,繁殖能力和适应能力强,条件适宜时曾大面积暴发成灾,给世界的农业生产带来了巨大的经济损失。灯光诱杀技术的田间应用不仅是棉铃虫预测预报的重要手段,而且是一种高效环保的棉铃虫防控措施。视觉对昆虫搜寻食物和配偶、躲避天敌和不安全环境具有重要的意义。本论文利用分子生物学手段深入研究了棉铃虫视觉基因的功能、趋光行为,一方面从进化上、分子角度上揭示夜行性昆虫对光的高度适应机制,另一方面为从行为上控制棉铃虫提供一定的理论依据,进一步完善棉铃虫综合防治体系。本研究主要包括以下八部分内容:(1)通过显微观察的方式,比较了棉铃虫雌雄蛾复眼的外部形态,观察了复眼内部的结构。结果表明:复眼呈半球形,小眼排列整齐紧密,中心小眼呈正六边形,边缘小眼不规则。雌雄蛾复眼距离、复眼长、复眼宽、复眼周长、单眼距离及小眼数量之间无显著性差异,但各项指标显示雄蛾复眼比雌蛾略大。棉铃虫蛾复眼属于重叠型像眼,小眼结构自外向内分为:屈光器、色素细胞、视杆和基膜四部分。(2)通过趋光行为测定,比较了棉铃虫不同日龄雌雄蛾对三种波段光源(绿光505nm、蓝光450nm、紫外光源365nm)的趋光反应率。结果表明:趋光反应率与光波段和棉铃虫性别无关,与日龄有关,1-3日龄蛾趋光反应率高于0和6日龄蛾。(3)利用RT-PCR、cDNA末端快速扩增技术(]RACE)从棉铃虫复眼中克隆得到UV、蓝光和长波敏感视觉基因,分别命名为Ha-UV(Gen Bank登录号:HQ641391)、Ha-BL(Gen Bank登录号:JX644013)和Ha-LW (GenBank登录号:JX392054),分别包括1258、1451和1574个碱基,编码379、382和381个氨基酸组成的多肽。(4)利用在线分析工具对推导得到的视蛋白氨基酸序列进行分析,结果表明:视蛋白Ha-UV(GenBank登录号:ADW20311)分子量(Mw)41.35kDa,等电点(pI)8.05;视蛋白Ha-BL(Gen Bank登录号:AGH28029)分子量43.22kDa,等电点7.02;视蛋白Ha-LW(Gen Bank登录号:AGH28027)分子量41.86kDa,等电点7.97。三种视蛋白均具有七个跨膜拓扑结构,包含G-蛋白偶联受体家族和视蛋白视网膜结合位点的特征序列。同源性分析表明:鳞翅目昆虫的视蛋白氨基酸序列同源性较高。(5)利用荧光定量PCR技术,探讨棉铃虫复眼中视觉基因表达是否存在昼夜节律。结果表明:在14L:10D光周期下,Ha-UV和Ha-BL的相对表达量在ZT1(进入光期1h)达到高峰,随后下降;Ha-LW的相对表达量在白天下降,夜晚升高。当棉铃虫转移至黑暗下,视觉基因的表达模式没有发生变化,说明视觉基因的表达受到自身的生物节律调控。本试验还证实了棉铃虫两个生物钟基因Ha-CRY1和Ha-CRY2在外周组织(复眼)中执行着生物钟的功能。(6)荧光定量PCR结果还表明:暗期光照和饥饿处理都能显著影响棉铃虫视觉基因的表达,交配前后棉铃虫视觉基因的表达没有变化。在UV和绿光6小时照射后,Ha-UV的相对表达量上调;视觉基因受到饥饿处理影响表达下调,其中Ha-Uv的相对表达量显著下降。(7)通过原核表达和人工合成多肽的形式获得抗原,结果表明:原核表达未能获得抗原;通过合成多肽的形式成功制备Ha-UV口Ha-LW的抗体,免疫组化和WestRN Blot技术证实抗体质量良好。Ha-LW视蛋白在ZT1、ZT5、ZT9和ZT21的表达量高于ZT13和ZT17;Ha-UV视蛋白在ZT5和ZT9的表达量高于其它时间点。(8)通过注射dsRNA的方式干扰视觉基因的表达,结果表明:蛹期注射dsRNA可以显著抑制蛹期视觉基因的表达,但成虫羽化后视觉基因表达急速上调,抑制效果消失;成虫期注射dsRNA至双侧复眼较单侧复眼相比,可以显著抑制视觉基因和视蛋白的表达。注射后24h,Ha-LW和Ha-UV表达受到最大抑制,均为64.3%;注射后24h, Ha-LW和Ha-UV视蛋白的表达受到最大抑制,分别为36.2%和33.7%。
其他文献
目的:观察采用运动疗法配合牵引治疗腰椎间盘突出症患者的临床疗效。方法:采用随机对照的原则,将60例腰椎间盘突出症患者分为治疗组和对照组,各30例,治疗组采用运动疗法配合牵
目的:探究中西医结合疗法在治疗桡骨下段骨折中的临床应用效果。方法:选择收治的76例桡骨下段骨折患者,随机分为治疗组38例和参照组38例,参照组患者予以手术切开复位钢板内固定
文章从研究生导师所具备的特征出发,阐述了青年人才成长为研究生导师过程中需要做好的准备工作。要明确研究生导师岗位职责,熟悉国家高等教育与人才培养目标政策,形成研究方
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield
目的探究中医护理在促进中风偏瘫患者康复中的应用效果。方法按随机原则将于我院接受治疗的84例中风偏瘫患者分为对照组(42例)与研究组(42例),给予对照组常规护理,研究组则采用中
金融危机下的新贸易保护主义越演越烈,对对外贸易依存度较高的中国产生了巨大的不利影响。温州作为浙江的外贸大户,其民营企业的出口产品受到贸易保护主义的影响尤为严重。本文
在全球范围内,生物入侵已成为21世纪最棘手的环境问题之一。目前,生物入侵机制尚不充分明确。外来入侵种的快速进化在其成功入侵过程中的作用越来越受到关注,但证据仍不充分
原粮入仓是平房仓储粮的重要环节,基于此,总结了平房仓入仓方式的现状,针对目前的入仓工艺进行分析,中粮工程科技(郑州)有限公司提出了新型入仓方式,其为我国平房仓入仓方式的
血管迷走神经性晕厥(vasovagal syncope,VVS)是指各种刺激在神经反射的作用下,导致机体肌肉和内脏的小血管舒张以及心率减慢,心排血量减少,出现低血压,大脑血流量急剧减少,临床上主要
聚焦重大项目,专项债品种试点范围有望进一步扩大,地方债补短板、稳投资的效果还将继续显现。