屎肠球菌发酵液对小鼠粪便微生物组成和免疫功能的影响以及人工瘤胃评价其对瘤胃发酵的影响

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本论文通过给BALB/c小鼠灌胃屎肠球菌发酵液,研究其对小鼠粪便微生物组成、血常规、淋巴细胞亚群及免疫球蛋白含量的影响,并通过体外法培养小鼠脾脏淋巴细胞,探讨灌胃屎肠球菌发酵液对ConA刺激脾脏淋巴细胞分泌细胞因子的影响。同时采用人工瘤胃装置评价屎肠球菌发酵液对瘤胃发酵的影响。试验一通过测定屎肠球菌的胆汁、模拟胃液和小肠液的耐受性来评价其是否适合作为益生菌。同时选用40只BALB/c雌性小鼠,研究连续灌胃21天屎肠球菌发酵液对小鼠粪便微生物组成的影响。结果表明,屎肠球菌具有较强的胆汁耐受能力,在胆汁中培养60 min时,与培养前对比活菌数显著增加了。并且对模拟胃液和小肠液也有一定的耐受能力,在模拟胃液和小肠液中分别培养60 min和120 min后进行活菌计数,仍能保证56.03%和92.16%以上存活。小鼠灌胃屎肠球菌发酵液后,粪便中肠内菌的数量有显著下降的趋势,各个时间点肠内菌的数值均极显著低于(P<0.01)对照组的数值。在屎肠球菌发酵液灌胃7和14天时,小鼠粪便中总好氧菌数值极显著高于对照组的数值,21天时,两组数值无显著性差异。同时小鼠灌胃屎肠球菌发酵液能够显著增加粪便中乳酸菌的量,其中灌胃7天时,试验组数值显著高于对照组数值,当灌胃14和21天时,小鼠粪便中乳酸菌的量极显著高于对照组的数值。试验二研究屎肠球菌发酵液对小鼠外周血血常规、淋巴细胞亚群、血浆与小肠液中免疫球蛋白及脾脏淋巴细胞分泌细胞因子含量的影响。结果表明小鼠灌胃屎肠球菌发酵液后外周血中DP细胞所占比例和红细胞平均血红蛋白浓度显著增加,红细胞平均体积显著降低。但对外周血中γδT细胞、NK细胞、Th细胞、Tc细胞和T细胞所占比例无显著影响,外周血中白细胞数、红细胞数、淋巴细胞绝对计数等血常规指标也无显著影响。灌胃屎肠球菌发酵液后小鼠血浆中IgG含量显著高于对照组,小肠液中IgA含量有所升高,但差异不显著;血浆中IgM和IgA含量均无显著影响。脾脏淋巴细胞分泌细胞因子数据显示,在这个试验期内,持续灌胃屎肠球菌发酵液对IL-2的浓度无显著影响,IL-4的浓度随着灌胃时间的增加而升高,在灌胃14天时达到最高峰,此时试验组小鼠脾脏淋巴细胞培养液中IL-4的浓度显著高于对照组的数值,随后浓度逐渐降低。小鼠脾脏淋巴细胞培养液中IL-6和IFN-γ浓度的变化趋势在对照组与试验组是一致的。对照组小鼠脾脏淋巴细胞培养液中IL-6和IFN-γ的浓度随着试验期的延长浓度不断增加。同时试验组小鼠脾脏淋巴细胞培养液中IL-6和IFN-γ的浓度随着屎肠球菌灌胃时间的增加而升高,在灌胃14天时达到最高峰,此时试验组这两种细胞因子的浓度均显著高于对照组。随后在灌胃21天时,这两种细胞因子的浓度开始迅速下降,此时试验组这两种细胞因子的浓度显著低于对照组。试验三利用持续动态人工瘤胃装置,采用完全随机试验设计,以不添加屎肠球菌发酵液为对照,研究了添加1.25×106和6.25×106 mL-1屎肠球菌发酵液对瘤胃液pH值、微生物蛋白(MCP)、氨态氮(NH3-N)、乙酸、丙酸、丁酸和总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度的影响。结果表明添加屎肠球菌发酵液对瘤胃pH值和MCP没有显著影响(P>0.05);但能显著提高瘤胃NH3-N浓度(P<0.01);1.25×106 mL-1屎肠球菌发酵液添加组较对照组显著提高了乙酸与总挥发性脂肪酸的浓度(P<0.05),而添加屎肠球菌发酵液对瘤胃丙酸和丁酸浓度及乙酸与丙酸的比例没有显著影响(P>0.05)。
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