VEGF对犬PDR形成及玻璃体内TGF-β1表达的影响

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目的:(1)通过荧光素眼底血管造影和视网膜眼底血管内皮细胞CD105免疫组化来检测3组试验犬增殖性糖尿病视网膜病变的成模率,探究VEGF对犬PDR形成的作用。(2)通过相对荧光定量PCR方法测定3组试验犬玻璃体内TGF-β1 m RNA相对表达量,探究VEGF对玻璃体内TGF-β1表达的影响。方法:(1)选取身体健康状况大致相同的中华田园犬,建造糖尿病模型犬,随机分成S1和S2两组,每组各5只。其中S1组双眼玻璃体腔内注射VEGF(0.2 ug/kg);S2组双眼玻璃体腔内注射等量生理盐水;另外随机挑选5只健康犬双眼玻璃体腔内注射等量生理盐水,作为空白对照,设为S3组。(2)玻璃体腔内注射后,连续8 w,每周对3组试验犬进行荧光素眼底血管造影双眼检查,观察并记录各组试验犬眼底血管渗漏情况,在玻璃体腔内注射后第8 w,采集各组试验犬左眼相同部位的视网膜组织,制成病理切片,进行CD105免疫组织化学染色,显微镜下观察记录各组免疫组织化学染色情况。(3)玻璃体腔内注射后第8 w,采集各组犬左眼玻璃体2 m L,移入离心管中液氮保存。通过相对荧光定量PCR的方法测定记录各组试验犬玻璃体内TGF-β1m RNA相对表达量。(4)最后通过Spass分析软件进行数据分析。试验结果:(1)荧光素眼底血管造影检查显示,S1组在第5 w时,1只试验犬眼底血管开始出现轻微渗漏,到第8 w时,S1组试验犬眼底血管均出现荧光渗漏。而S2与S3组,在8 w时间内,眼底血管均未出现荧光渗漏。(2)通过光学显微镜镜观察各组试验犬视网膜石蜡切片,S1组血管内皮细胞CD105免疫组化染色均为阳性,CD105阳性表达率为100%;S2与S3组血管内皮细胞CD105免疫组化染色均为阴性,CD105阳性表达率为0%。(3)通过相对荧光定量PCR的方法测定出:S1组玻璃体内TGF-β1m RNA的表达量极显著高于S2和S3组,是S2组的3.180倍(p<0.01),S3组的10.657倍(p<0.01)。S2组玻璃体内TGF-β1m RNA的表达量显著高于S3组,是S3组的3.351倍(p<0.05)。说明S1组玻璃体内TGF-β1 m RNA表达量最高,S2组次之,S3组最低。结论:(1)在糖尿病模型犬的基础上,外源性的玻璃体注射VEGF能够增大眼底视网膜血管壁的通透性,加速血管的渗漏,可以促进犬增殖性糖尿病视网膜病变的形成。(2)VEGF可以显著提高玻璃体内TGF-β1 m RNA的表达量,有正向调控作用,加快了视网膜新生血管形成。
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