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刚地弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫，在人和家畜等中间宿主体内可引发普遍的人畜共患弓形虫病。据报道，全球有多达20-30％的人感染弓形虫，且感染后没有有效的药物可以根治。考虑到目前还没有可使用的弓形虫疫苗，同时化学药物治疗将会给人体带来许多的副作用，故研制一种安全有效的弓形虫疫苗对控制人类和动物的弓形虫感染具有十分重要的意义。基于弓形虫MAPK1抗原良好的免疫原性和免疫反应性，本次研究我们选用了弓形虫MAPK1基因构建DNA疫苗。 目的:构建弓形虫MAPK1抗原的真核表达质粒，制备弓形虫MAPK1的DNA疫苗，评价该疫苗所产生的免疫保护效应，同时也进一步探索MAPK1蛋白作为弓形虫疫苗候选抗原的可能性。 方法:提取弓形虫RH株的RNA，通过RT-PCR技术逆转录形成cDNA，以cDNA作为PCR模板扩增出TgMAPK1基因。TgMAPK1基因的胶回收片段与TA克隆载体pEASY-T1连接构建重组质粒，之后进行PCR、双酶切鉴定并胶回收TgMAPK1基因片段。将上述胶回收产物与真核表达载体pEGFP-C1连接构建重组质粒pEGFP-MAPK1并进行PCR、双酶切及测序鉴定。重组质粒转染真核细胞HEK293T，观察细胞的荧光表达情况并通过Western blot检测细胞内目的蛋白的表达情况。大提质粒并稀释至特定浓度制备DNA疫苗。将BALB/c雌性小鼠(6-8周龄)随机分成3组（13只/组），即:PBS对照组、pEGFP-C1对照组和pEGFP-MAPK1实验组。每次免疫小鼠的时间间隔为2周，每只小鼠每次免疫的剂量为100μg，共免疫三次。ELISA检测分析免疫前后血清抗体和脾细胞培养上清液中细胞因子的变化。最后以每组1×103个速殖子的量攻击感染小鼠，每天观察小鼠的生存状态并记录其存活时间。 结果:PCR成功扩增出TgMAPK1基因片段，约1599bp。重组真核表达质粒经PCR鉴定出约1599bp的目的基因片段，经双酶切鉴定出约1599bp的目的基因片段和约4700bp的载体片段，测序结果比对GenBank数据库中该基因序列同源性为100％。重组质粒和空质粒转染的HEK293T细胞在荧光显微镜下可观察到绿色荧光，而空白对照组的细胞没有荧光现象。提取经重组质粒转染过的细胞总蛋白，Western blot检测到约58kD的目的蛋白条带。动物免疫实验中ELISA检测到实验组抗体IgG、IgG2a以及细胞因子IFN-γ在免疫后的水平明显高于对照组(P＜0.05)，而抗体IgG1和细胞因子IL-4、IL-10在实验组和对照组间无显著差异(P＞0.05)。与对照组相比，实验组小鼠经弓形虫速殖子攻击感染后存活天数显著延长(P＜0.05)。 结论:本研究所构建的弓形虫MAPK1核酸疫苗诱导产生了高水平的体液免疫应答和Th1型细胞免疫应答，同时该疫苗也对受感染小鼠产生了一定的免疫保护作用，故弓形虫MAPK1抗原是一个优良的疫苗候选抗原。