溶藻弧菌是我国南方海水养殖的重要病原菌之一。目前对于溶藻弧菌的致病因子研究得相对比较少。在通常致病性弧菌中存在的毒力基因tlh、trh、toxR、toxRS、ctxA和VPI与溶藻弧菌菌株的毒力没有直接相关性。对于海洋病原细菌而言，铁载体介导的铁摄取系统对其生长以及在宿主体内定植过程非常重要，是一种重要的致病因子。根据螯合Fe<3+>基团的性质，铁载体主要分为氧肟酸型、儿茶酚型和多羟羧基型。铁载体合成和转运基因一般成簇出现在染色体或质粒上。在革兰氏阴性细菌中，铁载体一铁复合物通常被定位于膜上、受铁调控且由TonB系统提供能量的受体蛋白识别，然后被细胞利用。 本研究观察到分离于发病鱼体的溶藻弧菌菌株MVP01和分离于海水的菌株ATCC33787都能够在限铁条件下产生铁载体。在本实验室前期鉴定了溶藻弧菌铁摄取调控蛋白编码基因fur的基础上，本研究进一步探索了病原溶藻弧菌中铁载体介导的铁摄取系统。 首先纯化和初步鉴定了溶藻弧菌的铁载体分子。采用Dowex 1×8阴离子交换树脂吸附、旋转蒸发浓缩、RP-HPLC分步收集以及冷冻干燥等步骤分离、鉴定出溶藻弧菌限铁培养代谢产物中的铁载体组分。该铁载体的分子量为434 Da，与副溶血弧菌铁载体vibrioferrin的分子量一致。在特定的RP-HPLC分析中，溶藻弧菌铁载体的保留时间为26～27 min，为两个连续组分。 本文采用质粒pTnMod-RKm’构建了一个溶藻弧菌转座子随机插入突变体文库，用CAS指示平板筛选得到一株铁载体合成缺陷株(A6717)和一株铁载体转运缺陷株(A9957)，从而克隆得到长约16 kb、与溶藻弧菌铁载体合成和转运功能相关的基因簇。该基因簇包含两个转录方向相反的操纵子pvs和pvu，共由11个完整ORF组成。该基因簇基因的表达受到环境中由Fur介导的铁离子浓度的调控。 采用单基因框内缺失技术，本文构建了上述基因簇中6个基因的染色体框内缺失株，分别考察了这些突变株的产铁载体能力和摄取铁载体-铁复合物的能力，证明pvsA和pvsD为溶藻弧菌铁载体合成所必需的基因，pvuA、pvuB和pvuE为该菌铁载体摄取过程所必需的基因，这些基因的突变株在限铁培养基中不能生长，但铁载体合成缺陷株却可以通过补加铁载体而恢复生长。同时证明psuA基因不参与溶藻弧菌自身铁载体一铁复合物的摄取功能，但该基因的缺失却使溶藻弧菌的产铁载体能力提高。本文克隆了TonB系统的编码基因，构建了TonB系统的插入失活或缺失突变株，考察了这些突变株的摄取铁载体一铁复合物的能力。结果表明溶藻弧菌含有功能性TonB1和TonB2系统，且这两套系统都与溶藻弧菌铁载体一铁复合物摄取功能相关。两者相互支持，共同参与控制着铁载体一铁复合物摄取过程的相关功能。 为了鉴定溶藻弧菌中群体感应系统中枢元件LuxO并研究其在调控铁载体等胞外产物产生过程中的作用，克隆了溶藻弧菌MVP01菌株中的luxO，构建了luxO和σ<54>编码基因，rpoN的插入失活或缺失突变株。仅缺失LuxO使溶藻弧菌胞外蛋白酶和溶血活性物质的产量增加，但减少了铁载体的分泌。对于σ<54>突变株，铁载体和蛋白酶产量增加而胞外产物中溶血活性物质的产生却明显减少。本文揭示了LuxO以σ<54>依赖或非依赖方式分别调控溶藻弧菌铁载体、胞外蛋白酶和溶血活性物质产生过程，LuxO具有正调控溶藻弧菌铁载体合成的功能。