纳他霉素高产菌株的诱变育种

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纳他霉素(natamycin)是一种高效、广谱的抗真菌抗生素,能有效地抑制酵母菌和霉菌的生长,在医疗、食品等方面显示了良好的应用前景。本论文对纳他霉素生产菌的诱变和选育等方面进行了系统的研究,主要完成了以下几个方面的工作,并得到了相关结论。建立了链霉素抗性与纳他霉素产量之间的关系模式,快速筛选纳他霉素高产突变株。并建立了一套快速、准确的产物分析方法,利用紫外分光光度计法快速测定发酵液中的纳他霉素含量。通过对纳他霉素生产菌(Streptomyces gilvosporeus ATCC 13326)SG-S菌株进行分离复壮,获得一株遗传性能较为稳定的菌株SG-17,以SG-17为出发菌株进行紫外线诱变育种,获得比出发菌株SG-17效价提高59%的菌株UV-125,对UV-125进行微波诱变,获得比UV-125效价提高33%的菌株M-63,以M-63为出发菌株进行了60Co-γ射线诱变,得到比M-63效价提高16%的菌株γ-188。γ-188的发酵效价达到4.58μg/mL,较SG-17提高了1.45倍。另外,在摇瓶水平进行了纳他霉素发酵培养基优化的研究,探索了不同碳源、不同氮源、无机盐和前体等各因子对纳他霉素生物合成的影响。结果表明:碳源以葡萄糖最佳,浓度为3.6%,氮源以大豆蛋白胨为最佳,最佳浓度为1.8%,无机盐K2HPO4对菌体生长的促进作用可从大豆蛋白胨中得到补充,同时研究了前体物质丙酸钠对于发酵产量的影响。最终通过正交分析确定了一套发酵培养基的最佳配方。另外,对纳他霉素发酵的条件也进行了考察,即菌株的发酵温度、初始pH值、溶氧量等。发现300mL三角瓶中装料量为25mL摇床转速为220rpm,pH值为7.2时,在温度28℃条件下发酵,纳他霉素发酵效价最高,其发酵效价提高了12%。
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