论文部分内容阅读
转基因技术是20世纪80年代发展起来的一项重要技术，通过向受精卵或早期胚胎中导入外源DNA，能有目的地对生物的遗传物质基础进行修饰，改造，培养出新的品系。鱼类转基因研究的一个重要方向就是定向育种，即通过转基因改良生产性状，如快速生长，抗病虫害，抗冻，抗盐碱等。随着RNA干扰现象的发现与反义技术的出现，人们已将RNAi与反义技术发展成为重要的基因治疗的新手段。
本研究利用RNAi与反义技术，以草鱼出血病为模型，稀有鮈鲫为模式动物，针对草鱼出血病病毒(GCRV)外壳蛋白VP7序列的cDNA片段构建shRNA表达载体pH1-siGCRV—pZero及反义载体pCAVP7cantisense，采用显微注射方法，将外源基因导入稀有鮈鲫受精卵，获得P0代转基因稀有鮈鲫。对培养至性成熟的P0代转基因稀有鮈鲫进行了攻毒实验，通过对攻毒后死亡时间的统计和转植基因表达的检测，得出以下结果：①转shRNA表达载体的稀有鮈鲫死亡率明显低于对照组，至攻毒后第20天死亡率仅有30％，而对照组在攻毒后第12天死亡率均达到100％；②反义组转基因稀有鮈鲫与对照组在死亡率上没有显著差异，但从死亡趋势线上可以看出反义组死亡峰值明显滞后于对照组，相差约18h，死亡峰值滞后与转植基因的表达相关。由此可以得出，不论是RNAi还是反义技术均能有效的抑制病毒的繁殖，具有一定的抗病效果。