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转基因技术是20世纪80年代发展起来的一项重要技术,通过向受精卵或早期胚胎中导入外源DNA,能有目的地对生物的遗传物质基础进行修饰,改造,培养出新的品系。鱼类转基因研究的一个重要方向就是定向育种,即通过转基因改良生产性状,如快速生长,抗病虫害,抗冻,抗盐碱等。随着RNA干扰现象的发现与反义技术的出现,人们已将RNAi与反义技术发展成为重要的基因治疗的新手段。
本研究利用RNAi与反义技术,以草鱼出血病为模型,稀有鮈鲫为模式动物,针对草鱼出血病病毒(GCRV)外壳蛋白VP7序列的cDNA片段构建shRNA表达载体pH1-siGCRV—pZero及反义载体pCAVP7cantisense,采用显微注射方法,将外源基因导入稀有鮈鲫受精卵,获得P0代转基因稀有鮈鲫。对培养至性成熟的P0代转基因稀有鮈鲫进行了攻毒实验,通过对攻毒后死亡时间的统计和转植基因表达的检测,得出以下结果:①转shRNA表达载体的稀有鮈鲫死亡率明显低于对照组,至攻毒后第20天死亡率仅有30%,而对照组在攻毒后第12天死亡率均达到100%;②反义组转基因稀有鮈鲫与对照组在死亡率上没有显著差异,但从死亡趋势线上可以看出反义组死亡峰值明显滞后于对照组,相差约18h,死亡峰值滞后与转植基因的表达相关。由此可以得出,不论是RNAi还是反义技术均能有效的抑制病毒的繁殖,具有一定的抗病效果。