论文部分内容阅读
柑桔是世界第一大水果,中国是最重要的原产中心之一,其栽培面积和年产量均居世界第一位。链格孢属真菌是植物重要的病原菌,种类多,寄主范围广,对环境和基质的适应性很强,在自然界中广泛分布。在柑桔园中,链格孢菌是一种重要的真菌病害,它侵染柑桔的叶片、茎干和果实,引起Allbinism白化病,粗皮柠檬链格孢叶斑病,链格孢茎干底部腐烂病,以及柑桔褐斑病和柑桔黑腐病,导致柑桔产业损失严重。目前,在中国西南地区柑桔园中发现,链格孢侵染卡里佐枳橙幼苗的叶片和枝条,引起大量幼苗的猝死,同时发现链格孢也是金柑流胶的致病菌之一。因此对柑桔园的链格孢菌进行致病机理和药剂防治的研究将为控制链格孢菌的流行奠定基础。本论文主要针对柑桔园7株链格孢菌的形态、遗传多样性、致病机理进行了初步研究,测定了20种杀菌剂的室内毒力。主要研究结果如下:1.通过组织分离法得到MP2、MP3、MP4、JG2、JG4、T1-4和T2-3 7株链格孢菌。通过形态观察和致病性检测分析发现7株链格孢菌之间具有一定差异。通过rDNA-ITS测序鉴定,7株链格孢菌只能被鉴定到Alternaria sp.。2.过rDNA-ITS序列聚类分析发现所有菌株被分为两大支,MP2和MP4与Alternaria tenui、Alternaria astragali、Alternaria sp. OUCMBI101196聚为一支。MP3,JG4,T1-4,T2-3与Alternaria alternate, Alternaria citri, Alternaria longipes等聚为一支。通过RAPD结果聚类分析发现7株链格孢菌被分为三大支,MP2,MP4和MP3聚为一类,JG4与T1-4和T2-3聚为一类,JG2单独聚为一类。综合rDNA-ITS及RAPD分析结果,MP2与MP4可能是相似种或相同种,与A.tenui、A.astragali、Alternaria sp. OUCMBI101196较近。MP3, JG4, T1-4, T2-3与A.alternate, A.citri, A.longipes等有较近的亲缘性,可能是相近种。而JG2单独为一支,还需进一步鉴定。这为柑桔园链格孢进行进一步的分类鉴定,为快速鉴定链格孢真菌奠定了基础。3.通过颜色反应,发现MP3毒素为酮类物质与,与已报道A. citri产生的ACT毒素相似。通过对MP3毒素处理枳橙叶片细胞的POD、APX舌性和MDA含量进行测定,结果表明,MP3毒素可以造成POD、APX活性下降,MDA含量升高。这表明MP3毒素能够抑制保护性酶的系统的作用,使细胞内活性氧清除系统遭到破坏,导致活性氧大量累积,致使质膜发生过氧化反应,产生MDA,而且MDA的含量随着MP3毒素浓度的增加而增加。证明MP3毒素作用位点为质膜,这与ACT毒素作用位点是质膜相一致。4.选取田间常用的20种杀菌剂,进行室内毒力测定。结果表明,各药剂在不同试验浓度下对链格孢MP3菌丝的生长均有不同程度的抑制作用,抑制率与浓度呈正相关。70%丙森锌EC50值为0.2475μg/mL,其抑菌效果最好;其次为10%苯醚甲环唑、50%丙环唑、27.12%碱式硫酸铜、16%松脂酸铜、10%井冈霉素、40%杜邦福星、70%氢氧化铜、22%抑菌唑、1.5%噻霉铜、65%代森锰锌;40%多菌灵的抑制效果最差,EC50值为911.7747μg/mL。到目前为止,防治链格孢菌较好的药剂仍然是代森锰锌和铜制剂类的杀菌剂。这为柑桔园链格孢菌的防治提供了参考。