杆状病毒是一类专一性感染节肢动物的病毒。在杆状病毒的生活史中存在着两种形态和组成迥异的病毒粒子----出芽型病毒粒子BV(budded virus)和包埋型病毒粒子ODV(occlusion-derived virus)。ODV参与了病毒入侵天然宿主的过程，即初始感染;BV则介导了病毒感染在宿主组织间的传播，即系统感染。截止目前，共发现了7个与杆状病毒初始感染密切相关的蛋白，即口服感染因子(per os infectivity factors，PIFs)。按照发现的先后顺序，分别把它们命名为P74(PIF0)、PIF1、PIF2、PIF3、PIF4、PIF5和PIF6。目前已有实验证据表明P74、PIF1和PIF2参与了ODV与宿主中肠BBM(bru shbordermembrane)受体的结合，但是具体的受体信息以及结合机制却不得而知。本文主要以棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus，HearNPV)为研究对象，对其PIF5进行了功能研究，并且制备了P74的单克隆抗体。研究结果有助于进一步揭示PIF5的生物学功能以及P74的结构。本研究分为三个部分：　　 第一章：文献综述。简要介绍了杆状病毒的应用现状、分类进化、结构组成及其复制周期。详细地阐述了与口服感染相关的研究，并对杆状病毒口服感染因子的研究现状进行了系统综述。同时简单介绍了本研究的研究目的及研究意义。　　 第二章：HearNPV pif5基因功能的研究。在HearNPV中，PTF5由orf15编码，预测大小为38 kDa。PIF5为晚期表达蛋白，特异性地定位在ODV的囊膜上，是ODV囊膜上的主要结构蛋白之一。PIF5不仅在已测序的所有杆状病毒中高度保守，而且在裸病毒(nudivirus)中也发现了PIF5的同源蛋白。序列对比发现，在PIF5的C端存在着3个完全保守的半胱氨酸。为了进一步研究pif5的生物学功能，我们运用λ噬菌体red重组系统构建了pif5缺失型重组病毒。通过Bac-to-Bac系统构建了pif5回复以及半胱氨酸单点突变的重组病毒。一步生长曲线表明，重组病毒BV具有和对照病毒类似的动力学曲线，表明pif5的缺失和单点突变不会影响病毒的感染和复制。细胞切片电镜观察显示，缺失pif5后，仍然能观察到正常形态的ODV病毒粒子，但是多角体的形态变得松散不均一，提示pif5可能与多角体的包装有关。简单的虫体感染实验表明，pif5的缺失和半胱氨酸的单点突变对其口服感染能力造成了一定的影响。　　 第三章：P74单克隆抗体的制备及表位鉴定。P74是最早发现的口服感染因子，在已测序的杆状病毒中高度保守。P74依靠C端锚定在ODV的囊膜上，其N端则暴露在囊膜表面。P74在ODV与BBM的受体结合过程中发挥着重要作用，但具体机制仍然悬而未决。研究表明，P74的剪切对其发挥生物学功能必不可少。在本研究中，首先，我们以原核表达的P74△2TM（去掉C端的两个跨膜区）为免疫原免疫三只BALB/c小鼠，制备了其单克隆抗体。然后，以P74的剪切模型为参考，我们将除去跨膜区的P74截短为三段，并通过表达载体pMAL-C2x进行原核表达。以这些原核表达的融合蛋白为抗原，通过免疫印迹的方法对所得到的7株单克隆细胞融合上清进行了初步的识别区段检测。随后又通过细胞免疫荧光的方法检测了它们识别真核表达的P74的能力。通过腹腔诱生法获得这7株单克隆细胞融合上清的腹水。最后，我们通过构建截短克隆，对其中的3株腹水20D9、22E1和22E12进行了识别表位的进一步分析。结果显示，20D9的抗原识别区段位于R144～T153，22E1和22E12的抗原识别区段位于T199～C219。