以番茄和烟草为寄主测定相似穿孔线虫致病性的方法研究

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相似穿孔线虫(Radopholus similis(Cobb,1893)Thorne,1949)是一种毁灭性的植物迁移性内寄生线虫,严重危害多种热带植物,被多国列为植物检疫危险性有害生物。番茄(Lycopersicon esculentum)和本氏烟草(Nicotiana benthamiana)均是研究植物与病原微生物互作的模式植物,迄今为止,番茄和烟草主要应用于根结线虫的互作研究,与相似穿孔线虫的互作研究报道较少。为了利用番茄和烟草研究相似穿孔线虫的致病机理及其与寄主的互作机制,本研究在25±1℃下,通过室内试管石英砂培养的方法,开展了相似穿孔线虫对番茄和烟草的寄生和致病性研究,优化筛选接种致病条件,建立以番茄和烟草作为寄主的相似穿孔线虫寄生性和致病性测定体系。具体研究结果如下。1)明确了相似穿孔线虫可以侵染番茄和烟草两种植物根系。烟草根系被侵染后,病害症状发生时间较早,于接种9d后出现明显的发病症状;番茄在被接种16d后根系开始出现明显的发病症状。该线虫能在番茄和烟草根系中进行繁殖,经过品红染色后,番茄和烟草分别在接种23d和30d后能在根内能观察到卵虫。此外,线虫在两种寄主根系侵染位点存在差异。在番茄根系内线虫主要侵染皮层,表皮细胞较完整;在烟草根系内线虫侵染皮层和表皮层,表皮和细胞均被破坏。2)明确了相似穿孔线虫对番茄和烟草致病性测定的最佳接种量和接种时间条件。通过比较4个种群在不同的接种量和接种时间下,侵染番茄和烟草根系的发病症状差异,确定了相似穿孔线虫侵染番茄最佳接种量为150条/株,侵染烟草最佳接种量为150条/株或200条/株。在最佳接种量条件下,相似穿孔线虫接种番茄和烟草23d为寄生性和致病性结果检测最佳时间。3)明确了相似穿孔线虫不同寄主和地理来源的种群对番茄及烟草的致病力存在差异。对番茄的致病性研究中,以SZ-SWK种群的致病性最强,HN6种群的致病性最弱;对烟草的致病性研究中,以GJ-LY323种群的致病性最强ML-HG种群的致病性最弱。此外,还明确了相似穿孔线虫对番茄和烟草这两种寄主致病力存在差异,GZH、HL-XY、ML-HG、SZ-SWK和SZ-FZ种群对番茄的侵染力强于烟草,更合适利用番茄作为模式寄主植物;HN6种群对烟草的侵染力强于番茄,更合适利用烟草作为模式寄主植物;而DBSR种群和GJ-LY323种群对番茄和烟草的侵染力差异较小,两种植物的均能作为模式植物进行相关研究。本研究通过测试相似穿孔线虫对番茄和烟草的侵染致病过程和规律,明确了相似穿孔线虫对番茄和烟草的寄生性和致病性特征,建立了以番茄和烟草为寄主的相似穿孔线虫寄生性和致病性测定体系:以150条/株和200条/株接种量接种30d苗龄的植株,在接种23d后检测繁殖量、发病程度和生长量。通过测定8个相似穿孔线虫种群对供试植物的致病性,明确了不同寄主和地理来源的相似穿孔线虫之间的差异,进一步证实以番茄和烟草为寄主的相似穿孔线虫的寄生性和致病性测定体系适用于不同种群间致病性差异、寄主范围和寄主适应性研究。本研究明确不同相似穿孔线虫种群对番茄和烟草具有不同的适应性,这为研究线虫与寄主互作寄主的选择提供参考,对进一步利用番茄和烟草作为模式寄主研究相似穿孔线虫的致病机理和防治方法具有重要意义。
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