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第一部分 基质金属蛋白酶在稽留流产中的作用及其调控机制研究 目的:探讨稽留流产发生中的免疫因素,研究基质金属蛋白酶在稽留流产中的作用及其调控机制。 方法:选取稽留流产(missed abortion)患者30例为实验组,同期健康早孕流产患者30例为对照组,术前禁食12小时,采集母亲空腹状态下外周静脉血5mL于EATD管内,静置离心并分离血清。采用ELISA法检测血清TGF-β1含量;在无菌条件下,于清宫术时获取两组患者的绒毛组织,通过焦磷酸乙二酯处理过的生理盐水洗净去除粘液和血液,滤纸去除表面水分,将剔除蜕膜组织后所得的组织置于灭活 RNA 酶的冻存管中,置-80℃冷冻保存。采用RT-PCR检测两组患者绒毛组织中NF-κB、TGF-β1、TIMP-1、MMP-9等相关基因表达,对目的基因进行扩增完成后分析数据。采用Western Blot法检测患者绒毛组织中NF-κB、TGF-β1、TIMP-1、MMP-9的蛋白表达。 结果: (1)实验组血清中 TGF-β1 的平均水平低于对照组(P<0.05)。 (2)实验组绒毛组织中 MMP-9 的 mRNA 表达量高于对照组,而 NF-κB1、TGF-β1 和TIMP-1mRNA 表达量均低于对照组(P<0.05); (3)实验组绒毛组织中 MMP-9 的蛋白表达水平高于对照组,NF-κB p50、TGF-β1和TIMP-1的蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05)。 结论:NF-κB表达水平的降低导致TGF-β1水平降低,从而影响MMP-9/TIMP-1的平衡,使ECM过度降解,导致胚胎植入失败及胎盘形成障碍,最终发生胚胎停育。 第二部分 基质金属蛋白酶在复发性流产中的作用及其调控机制研究 目的:探讨基质金属蛋白酶在复发性流产患者绒毛组织中的作用及调控机制,分析其与复发性流产的相关性及临床意义。 方法:选取复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者24例为实验组,同期健康早孕流产患者26例为对照组,检测患者绒毛组织中MMPs、NF-κB、IκB等 mRNA和相关蛋白的表达,检测血清TNF-α和IL-1β的含量。 结果: (1)实验组血清中TNF-α的平均水平高于对照组(P<0.05)。 (2)实验组绒毛组织中TNF-α、NF-kB、MMP-9 mRNA表达量高于对照组,I?BβmRNA表达量低于对照组(P<0.05); (3)实验组绒毛组织中MMP-9、NF-κB p65和p50的蛋白表达水平均高于对照组,IκBβ的蛋白表达水平低于对照组(P<0.05 )。 结论:外周TNF-α水平的升高,可影响绒毛组织细胞胞质中IκB蛋白的降解,活化NF-κB的表达水平升高,从而使MMP-9水平升高,蜕膜细胞外基质过度降解而引起胚胎脱落,导致最终植入失败而流产。该研究结果可为临床进一步认识RSA发生发展的机制提供新的思路和诊疗策略。