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研究背景miR-31定位在9p21.3，在不同肿瘤中的表达有非常明显的差异，但其参与肿瘤的生物学功能尚未得到很好阐明。国外研究发现，miR-31在乳腺癌细胞中相对低表达，且与肿瘤细胞的转移相关。进一步的研究揭示其可能通过作用于ITGA5、RDX和RhoA等靶分子抑制乳腺癌细胞的侵袭及转移。我们先前在对胃远端腺癌组织miRNA表达谱进行基因芯片研究，发现miR-31在远端胃腺癌组织中呈明显低表达。初步的细胞学研究发现，增加胃癌细胞中miR-31的表达，可抑制肿瘤细胞的移动能力，提示其可能参与了胃癌细胞的转移过程。所以，在以往工作的基础上，进一步深入研究miR-31在胃癌细胞侵袭及转移过程中的作用及机制，将有助于揭示miR-31在肿瘤中的生物学功能和胃癌侵袭转移的分子机制。目的1.检测miR-31在人胃癌组织及细胞系中的表达状况并分析其与胃癌临床病理因素的相关性；2.以胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823为模型，通过体外实验研究miR-31表达改变对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和粘附等功能的影响；3.利用miRNA靶基因预测软件，预测并鉴定可能参与miR-31功能的靶基因。方法1．检测miR-31在胃癌组织及细胞中的表达：选取我院普通外科手术胃癌组织20例，通过实时定量RT-PCR方法检测miR-31在其中的表达情况，并选取其癌旁组织作为对照；通过非参数检验，分析miR-31的表达丰度与胃癌患者年龄、性别、肿瘤大小、组织学分型及TNM分期的相关性。以人胃粘膜上皮细胞GES-1为对照，通过实时定量RT-PCR方法检测miR-31在人胃癌细胞系SGC-7901及BGC-823中的表达状况。2．MiR-31对胃癌细胞生物学功能的影响：利用细胞凋亡检测、细胞平板克隆实验、侵袭迁移实验、细胞划痕实验、细胞粘附实验，研究miR-31表达改变对胃癌SGC-7901及BGC-823细胞的增殖、凋亡、侵袭、移动和粘附功能的影响。3．MiR-31靶基因的预测：通过PicTar, TargetScan和miRDB等常用miRNA靶基因预测软件，共同预测出miR-31作用的重要靶基因；并在文献回顾的基础上筛选出与胃肿瘤转移关系密切的基因，并进行Western-Blot验证。结果1．实时荧光定量RT-PCR检测结果发现，miR-31在胃癌组织中的表达丰度明显低于其配对的癌旁组织（P＜0.05）；与癌旁组织相比较，平均下调至0.41倍。统计学分析发现胃癌组织中miR-31的表达与胃癌的淋巴结转移呈负相关(P＜0.01)，T、N分期越差，miR-31表达也随之降低(P＜0.05)，而与胃癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、组织学分型无明显相关性(P＞0.05)；miR-31在胃癌细胞系SGC-7901及BGC-823中的表达均较人胃粘膜上皮细胞系GES-1明显降低(P＜0.05)。2．通过脂质体瞬时转染技术，上调胃癌SGC-7901及BGC-823细胞中miR-31的表达，并通过RT-PCR检测证实转染成功；细胞凋亡检测及细胞平板克隆实验提示，增加胃癌细胞中miR-31的表达，肿瘤细胞的凋亡及克隆形成能力无明显变化。侵袭迁移实验提示，增加胃癌细胞中miR-31的表达，可明显抑制BGC-823细胞的侵袭及迁移能力；细胞划痕实验提示，增加胃癌SGC-7901细胞中miR-31的表达，可明显抑制细胞的移动能力；细胞粘附实验提示，增加胃癌SGC-7901细胞中miR-31的表达，其细胞粘附率明显下降。3．通过PicTar, TargetScan和miRDB等软件预测发现AKAP7、APBB2、CTNND2、 HIAT1、HIF1AN、JAZF1、KHDRBS3、MAP4K5、PEX5、PPP2R2A、RGS4、RHOA、RSBN1、SEPHS1、SH2D1A、SLC6A6、SNX4、 STX12、TACC1、TACC2、YWHAE等21个分子为miR-31的共同靶基因。进一步通过Pubmed检索发现CTNND2, KHDRBS3, RHOA, TACC1及YWHAE等5个为与胃癌相关的基因，其中RHOA经Western-Blot证实可能为miR-31作用于胃癌细胞的靶基因。结论1．miR-31在胃癌的发生发展中起着重要作用：miR-31在胃癌组织中的表达较癌旁组织明显降低，其表达丰度与胃癌组织的N分期呈负相关；2．miR-31可抑制胃癌细胞的侵袭和转移能力，但对细胞的凋亡增殖无明显影响；3．预测RhoA可能为miR-31抑制胃癌细胞转移的靶基因。