迷迭香酸对6-羟基多巴胺处理的MES23.5细胞的保护作用研究

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帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种多发于中老年的中枢神经系统退行性疾病。PD的神经病理学基础是黑质(substantia nigra,SN)致密带多巴胺(dopamine,DA)能神经元的变性脱失以及由此而导致的纹状体DA含量降低。迄今为止,PD的病因学仍未完全明了。迷迭香酸(Rosemarinic acid,RA)是一种水溶性的含多酚羟基的酸,1958年从迷迭香植物(Rosmarinius officinalis)中首次分离提取而得名。已有实验证明RA具有抗氧化、清除自由基、螯合金属离子等多种活性,越来越多的证据表明氧化应激在PD的发病中是一个关键因素,然而有关RA对PD的防治作用及对DA能神经元的保护作用尚未见报道。本实验应用经典的神经毒性药物6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA),选用多巴胺能神经细胞系MES23.5细胞,应用流式细胞仪技术、分光光度法检测了RA对细胞内氧化应激状态的影响,并深入探讨其可能机制。结果如下:1.6-OHDA(100μmol/L)处理MES23.5细胞24 h后,细胞存活率明显降低,与正常对照组相比差别具有高度统计学意义(P<0.01)。上述改变可以被10-4,10-5mol/LRA预处理所阻断(P<0.05)。2.分光光度法检测6-OHDA发生细胞外自氧化程度的结果显示:6-OHDA组和RA组6-OHDA自氧化的程度明显增高,与正常对照组相比差别有明显统计学意义(P<0.01);但是6-OHDA组和RA组6-OHDA自氧化的程度相比,差别没有统计学意义(P>0.05)。3.6-OHDA(100μmol/L)处理MES23.5细胞24 h后,细胞线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potential,△Ψm)明显降低,细胞内活性氧物质(reactive oxide species,ROS)生成增加,与正常对照组相比差别具有高度统计学意义(P<0.01)。上述改变可以被10-4,10-5mol/L RA预处理所阻断(P<0.05)。4.10-4~10-2mol/L RA表现出具有浓度依赖性的铁离子螯合能力,与正常对照组相比差别具有高度统计学意义(P<0.01);但是10-5mol/L RA组吸光度值与正常对照组相比,差别没有统计学意义(P>0.05)。5.100μmol/L铁处理MES23.5细胞4h后,细胞的△Ψm明显降低,细胞内ROS生成增加,与正常对照组相比差别有明显统计学意义(P<0.01)。上述改变可以被10-4,10-5mol/LRA预处理所阻断(P<0.01)。上述结果表明:RA预处理MES23.5细胞可以部分逆转6-OHDA导致的△Ψm降低和ROS产生增加,也可以部分逆转细胞内高铁水平造成的△Ψm降低和ROS的产生增加,从而减轻氧化应激和高铁水平对细胞造成的损伤。本实验所研究的RA对DA能神经元的保护作用以及对其可能机制的初步探讨,为PD的预防与治疗提供新的可能方案,为该药的新用途和进一步开发为可用于临床防治PD的新药提供实验依据。
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