人骨形态发生蛋白-2基因在昆虫细胞中的表达

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研究人员利用杆状病毒载体,在昆虫细胞Spodoptera frugiperda 9(Sf9)中表达了具 有完整生物活性的分泌型hBMP--2,为基因工程大量生产hBMP--2运用于临床和进一步深入研究BMP--2对骨重建和骨细胞分化的作用机制创造条件.该研究首先将编码包含hBMP--2 N-端信号肽、中间前肽以C-端成熟共1188bp的cDNA片段,插入杆状病毒表达载体pGastBacl的多 克隆位点,受控于pPolh启动子构建成pGastBacl/hBMP--2重组质粒(命名为pFBBMP).然后重组子转化大肠杆菌DH10Bac,转座后,挑选阳性菌落,提取穿梭载体(bacmid) DNA.经PCR鉴定后,以重组bacmid DNA转染Sf9细胞株,病毒上清经空斑试验及PCR鉴定后,收集重组病毒,扩大传染Sf9细胞株,表达产物经SDS-PAGE初步鉴定后,体外观察其对原代培养成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果表明,在昆虫细胞中成功表达了具有完整生物活性的分泌型hBMP--2蛋白,这种重组蛋白体外可诱导原代培养成骨细胞碱性磷酸酶活性的增加,且呈明显的量效相性.
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