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研究背景：急性髓性白血病(Acute myeloid leukemia, AML)是成人最常见的一类血液系统恶性疾病,主要特点是髓系及其前体细胞在骨髓和外周血中大量增生累积。化疗作为目前AML治疗的主要手段虽已取得较大进展,但治疗效果仍不甚理想,AML患者免疫功能异常是其难治和死亡率较高的重要原因之一。T细胞免疫作为抗肿瘤免疫有效的重要环节,其调节网络异常是AML发病和转归过程中的重要因素。其中Th细胞在免疫系统网络中处于枢纽地位,是免疫应答的主要调控者和效应者。以往对Th细胞的研究主要限于AML外周血中的Th1、Th2细胞亚群的变化,近年发现的Th细胞亚群还包括Th17、Treg、Th22和Th9。已有研究报道,白血病患者外周血中存在Thl/Th2比值降低,Treg细胞比例的升高。而对Th17细胞在AML中的研究仅有几篇文献报道,且存在分歧。Th22和Th9细胞作为新型Th亚群,尚未见其在实体肿瘤及AML中作用的研究报道。上述Th细胞在AML骨髓微环境中的作用尚未确定。研究目的：本研究旨在阐明AML骨髓微环境中Th亚群(特别是较新发现的T’h17/Treg、Th9和Th22)的构成及免疫调节机制,探讨其对AML临床特征、疗效、病程及预后的意义,并可能为AML的治疗提供新的靶点。研究方法：2012年1月至2013年5月,选取山东大学齐鲁医院的48例新诊断、34例完全缓解、19例难治复发的AML患者及15例小低贫对照者为研究对象,收集骨髓液。采用流式细胞术检测Th1、Th2、Th17、Treg、Th22以及Th9细胞在各组中的表达情况,Thl/Th2和Th17/Treg比值的变化；实时定量PCR技术检测上述Th亚群特异性转录因子RORC、T-bet、GATA-3、AHR以及Foxp3mRNA在各组中的表达情况；收集骨髓上清,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测骨髓上清中Thl相关细胞因子(IFN-y),Th2相关细胞因子(IL-4),Th17相关细胞因子(IL-17), Treg相关细胞因子(IL-10, TGF-p), Th22相关细胞因子(IL-22),Th9相关细胞因子(IL-9)以及IL-6在各组中的水平。结果：1.Th22细胞在AML骨髓微环境中的变化：与对照组和AML完全缓解组相比,Th22细胞在初诊组和难治复发组中的比例明显降低(p<0.05)；骨髓上清中IL-22的水平在初诊组和完全缓解组中较对照组明显降低(p<0.05),而在AML的三个组中,IL-22水平无统计学差异(p>0.05)。2.Th17、Treg及其平衡在AML骨髓微环境中的变化：2.1与对照组、AML难治复发和完全缓解组相比,Th17细胞比例在初诊组中明显降低(p<0.05),而骨髓上清中IL-17的水平在初诊组也有下降的趋势,但是尚未达到统计学意义(p>0.05)；对于Th17特异性转录因子RORC mRNA表达水平,与对照组相比,AML三组均有明显升高(p<0.05)。2.2与对照组相比,Treg细胞在AML初诊组和难治复发组中比例明显升高(p<0.05)；相应的,骨髓上清中IL-10的水平在AML初诊组中较其余三组明显升高；而上清中TGF-β的水平在AML初诊组和难治复发组中较另两组有明显降低(p<0.05);Treg细胞特异性转录因子Foxp3mRNA表达水平在初诊组和难治复发组中较对照组均有明显的上升(p<0.05)；2.3Th17和Treg细胞在AML患者中存在比例的失衡。与对照组和AML缓解组相比,Th17/Treg比值在AML初诊组和难治复发组中都有明显的降低(p<0.05)3.Th1、Th2及其平衡在AML骨髓微环境中的变化：3.1与对照组、AML难治复发和完全缓解组相比,Thl细胞在AML初诊组中比例明显降低(p<0.05)；Thl细胞在难治复发组中比例较缓解组中也明显降低(p<0.05)；对于AML骨髓上清中IFN-y的水平,与缓解组相比,初诊组和难治复发组都明显降低(p<0.05)；3.2与对照组和AML缓解组相比,Th2细胞比例在初诊组中明显下降(p<0.05)；初诊组中骨髓上清中IL-4水平较对照组却明显升高(p<0.05)；Th2细胞特异性转录因子GATA-3mRNA的表达水平在AML三个组中较对照组均有明显的降低(p<0.05)；3.3Th1和Th2细胞在AML患者中存在比例的失衡。AML初诊组中Th1/Th2比值较缓解组明显降低(p<0.05)。4.Th9细胞在AML骨髓微环境中的变化：尽管Th9细胞比例在四组中无明显差异(p>0.05),但骨髓上清中IL-9水平在初诊组中较对照组明显上升(p<0.05)。5.AML初诊患者骨髓微环境中Th亚群的临床相关性：AML初诊患者中,Th1细胞与Th17细胞存在着正相关；而Th1细胞和Th2细胞比例与外周血白细胞数均存在明显的负相关；Thl/Th2比值,Th17/Treg比值与骨髓原始细胞数也都存在明显的负相关。6.化疗干预可以部分改善上述Th亚群和细胞因子的异常：AML患者化疗达到完全缓解后,Th1、Th2、Th22、Th17细胞比例有明显回升,Treg细胞比例有明显下降(p<0.05),而骨髓上清中IL-10和IL-9水平也明显下降,TGF-β水平明显升高,均有统计学差异。7.动态贝叶斯网络模型提示：Th17位于Th亚群网络中心位置。结论：1.骨髓中Th22、Th17、Th1、Th2细胞比例及其相关细胞因子的水平下调,Treg细胞及其相关免疫抑制因子水平的上调,Th17/Treg、Thl/Th2平衡的失调和异常表达的特异性转录因子共同造成AML骨髓微环境中的免疫抑制状态,可能参与白血病的发生和进展。2.根据AML骨髓中Th亚群变化所构建的粗放型动态贝叶斯网络,提示Th17细胞位于此网络的中心位置,其与Treg的平衡能直接或间接影响其他因子的表达,因此Th17/Treg作为关键节点,可能成为未来AML研究和治疗的靶点。