论文部分内容阅读
目的：本论文的研究对象为金银花新品种，前期研究表明，在金银花新品种的正丁醇提取部位，马钱苷酸和断氧化马钱子苷等环烯醚萜苷类化合物含量较高。通过系统的文献调研发现，目前国内外对金银花环烯醚萜苷类化合物的研究尚不完善，存在一定的缺陷。因此，本论文的研究重点是对金银花新品种正丁醇提取部位环烯醚萜苷类及一些大极性成分进行系统的提取分离、纯化、结构鉴定和药理活性研究，以期发现新化合物或发掘新的药理活性，为金银花药材质量标准制定及深度开发利用提供参考。
方法：1、将金银花新品种正丁醇部位用大孔树脂柱和硅胶柱等色谱方法进行成分分离，使用高效制备液相色谱技术对化合物进行纯化。化合物的结构鉴定采用IR、HR-ESI-MS、1D和2DNMR等技术方法。最后对得到的化合物依次进行抗炎、抗菌、抗氧化和细胞毒药理活性筛选。抗炎活性研究检测了化合物对大鼠多形核白细胞(PMNs)中由血小板活化因子(PAF)引起β-葡萄糖醛酸苷酶释放的抑制作用，抗菌活性研究评价了化合物对革兰氏阳性菌株(金黄色葡萄球菌ATCC25923和耻垢分枝杆菌ATCC607)及革兰氏阴性菌株(铜绿假单胞菌ATCC27853和大肠杆菌ATCC25922)的抑制活性，抗氧化活性研究以化合物对1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除活力为评价指标，细胞毒活性研究采用四唑盐(MTT)比色法，评价了化合物对人乳腺癌细胞MCF-7和肺癌细胞A549的抗增殖作用。
2、利用高速逆流色谱(HSCCC)技术，首次建立了金银花环烯醚萜苷类化合物的HSCCC分离方法。确定的适宜溶剂体系为：乙酸乙酯/正丁醇/甲醇/水(5∶1∶1∶5，v/v/v/v)。分离得到的化合物结构鉴定采用UV、IR、HR-ESI-MS、1D和2DNMR等技术方法。最后对得到的化合物进行了药理活性筛选。
结果：1、总结了环烯醚萜苷类化合物的结构类型、分离方法、生物活性及生物合成途径等内容，为后续展开相关研究奠定了基础。
2、共鉴定27个化合物，依次为7-O-ethylsweroside(1)、7-dioxolanylsecologanin(2)、secologanindimethylacetal(3)、(7R)-secologainn-butylmethylacetal(4)、(7S)-secologainn-butylmethylacetal(5)、adinosideF(6*)、vogeloside(7)、7-epi-vogeloside(8)、adinosideG(9*)、dioxindile-3-acetae(10)、ethyldioxindile-3-acetae(11)、lonijapoglycolA(12*)、lonijapoglycolB(13*)、secologanindimethylacetalB(14*)、secologanin(15)、secologaninmethylhemiacetal-yl-6-secologanindimethylacetal(16)、(7S, 8S)-3-methoxy-3,7-epoxy-8,4-oxyneoligna-4,9,9-triol(17)、(Z)-aldosecolohanin(18)、aldosecolohaninC(19*)、(E)-aldosecolohanin(20)、loxylostosidineA(21)、trifostigmanosideⅡ(22)、loxylostosidineB(23)、aldosecolohaninB(24*)、loniceralansideA(25*)、(7S, 8R)-dihydrodehydrodiconiferylalcohol-4,9-di-O-α-L-rhamnopyranoside(forsythialanside D, 26)和eugenyl-α-L-arabinopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(27)。其中，有8个新化合物。化合物6*、9*、12*、13*、14*、19*和24*为新的环烯醚萜苷，化合物25*为新的木脂素。此外，6个已知化合物2、10、11、17、26和27是首次从金银花中分离得到的成分。对上述化合物采用多种药理模型进行活性筛选。研究结果表明，新化合物6*、9*、14*、19*和25*及已知化合物1、2、3、4、11和26具有明显地抑制由PAF刺激产生的β-葡萄糖醛酸酶的释放作用，IC50值范围为3.05-7.90μM；新化合物6*、9*和25*及已知化合物1、18、20和21对金黄色葡萄球菌ATCC25923具有一定的抑制活性，MIC值范围为10.5-17.5μg/mL；新化合物25*及已知化合物21和23对DPPH自由基具有较明显的清除活性，IC50值范围为8.0-15.3μM；已知化合物10和11表现了微弱的抗MCF-7细胞增殖活性，抗增殖率分别为17%和23%。
3、首次建立了金银花环烯醚萜苷类化合物的HSCCC分离方法。该方法成功从金银花新品种正丁醇部位分离纯化得到5个环烯醚萜苷，其中adinosideF和adinosideG是2个新化合物。药理活性研究表明，5个化合物对由PAF刺激的β-葡萄糖醛酸苷酶的释放有一定的抑制活性，对金黄色葡萄球菌ATCC25923有轻度抑制活性。
结论：1、从金银花新品种正丁醇部位分离得到27个化合物并进行了药理活性筛选。其中，有7个新的环烯醚萜苷和1个新的木脂素。此外，有6个已知化合物是首次从金银花中分离。该课题丰富了金银花化学成分的研究内容，同时药理活性的筛选将为金银花植物资源的深度开发利用提供参考。
2、首次报道了采用HSCCC方法从金银花新品种正丁醇部位分离环烯醚萜苷类化合物，这为今后的分离工作提供了更简易的方法。
方法：1、将金银花新品种正丁醇部位用大孔树脂柱和硅胶柱等色谱方法进行成分分离，使用高效制备液相色谱技术对化合物进行纯化。化合物的结构鉴定采用IR、HR-ESI-MS、1D和2DNMR等技术方法。最后对得到的化合物依次进行抗炎、抗菌、抗氧化和细胞毒药理活性筛选。抗炎活性研究检测了化合物对大鼠多形核白细胞(PMNs)中由血小板活化因子(PAF)引起β-葡萄糖醛酸苷酶释放的抑制作用，抗菌活性研究评价了化合物对革兰氏阳性菌株(金黄色葡萄球菌ATCC25923和耻垢分枝杆菌ATCC607)及革兰氏阴性菌株(铜绿假单胞菌ATCC27853和大肠杆菌ATCC25922)的抑制活性，抗氧化活性研究以化合物对1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除活力为评价指标，细胞毒活性研究采用四唑盐(MTT)比色法，评价了化合物对人乳腺癌细胞MCF-7和肺癌细胞A549的抗增殖作用。
2、利用高速逆流色谱(HSCCC)技术，首次建立了金银花环烯醚萜苷类化合物的HSCCC分离方法。确定的适宜溶剂体系为：乙酸乙酯/正丁醇/甲醇/水(5∶1∶1∶5，v/v/v/v)。分离得到的化合物结构鉴定采用UV、IR、HR-ESI-MS、1D和2DNMR等技术方法。最后对得到的化合物进行了药理活性筛选。
结果：1、总结了环烯醚萜苷类化合物的结构类型、分离方法、生物活性及生物合成途径等内容，为后续展开相关研究奠定了基础。
2、共鉴定27个化合物，依次为7-O-ethylsweroside(1)、7-dioxolanylsecologanin(2)、secologanindimethylacetal(3)、(7R)-secologainn-butylmethylacetal(4)、(7S)-secologainn-butylmethylacetal(5)、adinosideF(6*)、vogeloside(7)、7-epi-vogeloside(8)、adinosideG(9*)、dioxindile-3-acetae(10)、ethyldioxindile-3-acetae(11)、lonijapoglycolA(12*)、lonijapoglycolB(13*)、secologanindimethylacetalB(14*)、secologanin(15)、secologaninmethylhemiacetal-yl-6-secologanindimethylacetal(16)、(7S, 8S)-3-methoxy-3,7-epoxy-8,4-oxyneoligna-4,9,9-triol(17)、(Z)-aldosecolohanin(18)、aldosecolohaninC(19*)、(E)-aldosecolohanin(20)、loxylostosidineA(21)、trifostigmanosideⅡ(22)、loxylostosidineB(23)、aldosecolohaninB(24*)、loniceralansideA(25*)、(7S, 8R)-dihydrodehydrodiconiferylalcohol-4,9-di-O-α-L-rhamnopyranoside(forsythialanside D, 26)和eugenyl-α-L-arabinopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(27)。其中，有8个新化合物。化合物6*、9*、12*、13*、14*、19*和24*为新的环烯醚萜苷，化合物25*为新的木脂素。此外，6个已知化合物2、10、11、17、26和27是首次从金银花中分离得到的成分。对上述化合物采用多种药理模型进行活性筛选。研究结果表明，新化合物6*、9*、14*、19*和25*及已知化合物1、2、3、4、11和26具有明显地抑制由PAF刺激产生的β-葡萄糖醛酸酶的释放作用，IC50值范围为3.05-7.90μM；新化合物6*、9*和25*及已知化合物1、18、20和21对金黄色葡萄球菌ATCC25923具有一定的抑制活性，MIC值范围为10.5-17.5μg/mL；新化合物25*及已知化合物21和23对DPPH自由基具有较明显的清除活性，IC50值范围为8.0-15.3μM；已知化合物10和11表现了微弱的抗MCF-7细胞增殖活性，抗增殖率分别为17%和23%。
3、首次建立了金银花环烯醚萜苷类化合物的HSCCC分离方法。该方法成功从金银花新品种正丁醇部位分离纯化得到5个环烯醚萜苷，其中adinosideF和adinosideG是2个新化合物。药理活性研究表明，5个化合物对由PAF刺激的β-葡萄糖醛酸苷酶的释放有一定的抑制活性，对金黄色葡萄球菌ATCC25923有轻度抑制活性。
结论：1、从金银花新品种正丁醇部位分离得到27个化合物并进行了药理活性筛选。其中，有7个新的环烯醚萜苷和1个新的木脂素。此外，有6个已知化合物是首次从金银花中分离。该课题丰富了金银花化学成分的研究内容，同时药理活性的筛选将为金银花植物资源的深度开发利用提供参考。
2、首次报道了采用HSCCC方法从金银花新品种正丁醇部位分离环烯醚萜苷类化合物，这为今后的分离工作提供了更简易的方法。