香蕉、甘蔗和木薯种苗液体间歇浸没快繁技术的优化

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植物组织培养的快速发展,使得如何开展自动化以提高组培苗质量、增殖率、减轻劳动强度最终能降低生产成本已成为植物组织培养技术研究的重点之一。因此,间歇浸没式生物反应系统(Temporary Immersion Bioreactor system,TIBs)应运而生,它最早是应用在植物组织培养及次生代谢产物生产上的一个装置,近30年来,研究者们已将其设计的更加完善,把培养材料放在液体培养基中间歇浸泡培养,使其能用于大量生产以达到快速繁殖的目的,这样培养的组培苗有更强的抗性,能提高后期驯化阶段幼苗的成活率,最终降低劳动成本。本研究采用自主研发的升降式液体间歇浸没培养装置,以香蕉、甘蔗、木薯三种组培苗为试材,利用该系统研究浸没频率、蔗糖含量、接种密度、接种材料继代数等参数在组培苗增殖率、株高等方面的影响,再对组培苗生根壮苗培养后进行假植。试验结果如下:1、对草本植物香蕉、甘蔗及灌木植物木薯三种植物分别进行液体静置、固体、间歇浸没培养,研究这三种培养方式对组培苗的影响,结果为:香蕉和甘蔗继代增殖的最适培养方式为液体间歇浸没培养,香蕉TIBs系统增殖倍数为7.53,是固体培养增殖倍数的2.43倍,生根培养中,固体培养生根数为5.80,略优于TIBs培养的5.20。甘蔗TIBs系统增殖倍数为11.5,是固体培养增殖倍数的3.03倍,生根培养时,TIBs生根数为4.00,优于固体培养的3.40。木薯继代增殖的最适培养方式为固体培养,固体培养增殖倍数为3.40,生根数为4.60,TIBs系统增殖倍数为3.00,生根数为3.20。2、在TIBs系统中不同间歇频率对不同组培苗的影响试验中,研究结果为:香蕉TIBs培养增殖倍数最高的间歇频率为15min/2h,增殖倍数为6.42,株高、茎粗最高的间歇频率为是10min/8h;最适宜甘蔗TIBs系统培养的间歇频率为10min/8h,6-BA最适浓度为3mg/L,增殖倍数为11.53;最适宜木薯间歇浸没培养的频率为10min/8h,增殖倍数为3.00。3、在TIBs系统中不同含糖量对不同组培苗的增殖影响试验中,最适宜TIBs系统中香蕉、甘蔗、木薯组培苗增殖的蔗糖浓度都为30g/L,在蔗糖浓度为30g/L时香蕉TIBs系统培养最高增殖倍数为8.62,最适激素浓度为3mg/L6-BA+0.3mg/LNAA,增殖倍数为6.73;在蔗糖浓度为30g/L条件下,甘蔗TIBs系统培养最适激素浓度为6-BA3mg/L+NAA0.1mg/L,增殖倍数为7.54;木薯组培苗在蔗糖浓度为30g/L,不含激素时增殖倍数为3.00。4、在相同条件下,TIBs系统最适于香蕉、甘蔗组培苗增殖培养的密度均为10株/瓶,增殖倍数分别为7.30、8.20。5、以香蕉组培苗从第五代到第九代为试材进行增殖培养,最适宜香蕉组培苗在TIBs系统中继代增殖的继代材料为第七代,增殖倍数为7.17;以甘蔗组培苗从第四代到第七代为试材,TIBs系统最适合甘蔗继代增殖的材料为第五代,增殖倍数为7.32。6、对不同培养方式培养的组培苗进行假植试验,TIBs系统培养的香蕉、甘蔗组培苗假植成活率都略优于固体及液体培养,TIBs系统培养的香蕉、甘蔗苗假植成活率分别为90.63%、82.22%,固体培养的成活率分别为81.82%、77.78%;木薯传统的组培苗假植成活率优于TIBs培养的,TIBs培养的假植成活率为0,传统的组培苗假植成活率为63.33%。
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