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背景：骨肉瘤是骨的原发性恶性肿瘤,好发于儿童及青少年。据统计,原发性骨肿瘤中,其发病率仅次于浆细胞骨髓瘤居第2位。骨肉瘤恶性程度高,较易复发和转移,预后差。现阶段治疗方法主要包括手术、化疗、放射治疗及综合疗法,近年来骨肉瘤截肢率明显降低,很大程度归功于以化疗为主的综合治疗技术的进步,继续探索全新有效的化疗药物对骨肉瘤的治疗意义重大。淫羊藿为祖国传统中草药,性温,味辛,兼具补肾壮阳、祛风除湿之功效。现代药理研究表明,其有效成分为黄酮类化合物,此外尚含有多糖类化合物等。淫羊藿能改善心肌缺血、降血压、调节免疫、抑制血栓形成、抗骨质疏松、抗肿瘤、抗衰老等作用。从淫羊藿中提取的黄酮单体成份,为淫羊藿苷,具有多种生物活性,包括改善心血管功能、抗肿瘤、影响内分泌、抑制血小板聚集、抗衰老及调节免疫功能等。淫羊藿素(Icaritin, ICT)作为淫羊藿苷的衍生物,系淫羊藿经多重步骤的萃取、硅胶层析、洗脱后制得,具有抗氧化、防治骨质疏松、促进成骨细胞生长和增殖、治疗心血管疾病、保护神经变性损伤、防治乳腺癌等作用。淫羊藿素的分子式为C21H20O6,分子量368,淫羊藿素与其前体物质淫羊藿苷具有极其相似的分子结构,但淫羊藿素酮环母体的两个羟基取代了淫羊藿苷中的糖苷元,从药物构效关系的角度推测其抗氧化功能将进一步增强。淫羊藿素相关研究提示,其抗肿瘤作用己日益引起人们的重视,成为近年来研究的热点。淫羊藿素对于多种肿瘤细胞株,如乳腺癌、前列腺癌、肝癌、子宫内膜癌和慢粒等,皆有抑制增殖和诱导凋亡的作用。但至今,淫羊藿素作用于骨肉瘤细胞的上述方面的研究还没有相关报道。本实验通过研究淫羊藿素对体外培养的人骨肉瘤细胞MG-63增殖、凋亡的影响,探讨其对骨肉瘤细胞的作用,为临床上骨肉瘤的治疗提供新的理论与方法。目的：观察淫羊藿素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响,探讨淫羊藿素对人骨肉瘤细胞的作用。方法：药物作用细胞后,使用倒置显微镜,观察MG-63细胞的形态学变化；四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测MG-63细胞的增殖；Annexin V/PI双染色,流式细胞术检测细胞的凋亡；Caspase活性定量检测试剂盒检测半胱天冬特异性蛋白酶-9,8,3(Caspase-9,8,3)的活性。结果：1.倒置显微镜观察淫羊藿素处理后的MG-63细胞,显示随药物浓度的增加或药物作用时间的延长,细胞增殖受到抑制,细胞数量降低,细胞逐渐缩小、失去贴壁能力而浮起、折光度降低、细胞分布松散。2.MTT比色法检测不同浓度的淫羊藿素作用于MG-63细胞,药物浓度为4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L、32μmol/L时,药物浓度越高,淫羊藿素对细胞的抑制率越高,作用时间越长,对细胞的抑制作用越显著(P<0.05)。当淫羊藿素浓度为641μmol/L时,其抑制率较32μmol/L浓度组无明显的增加,其对细胞增殖抑制的效果无明显的加强(P>0.05)。可见淫羊藿素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖的抑制存在时间和浓度相关性。3.流式细胞仪分析：4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L、32μmol/L的淫羊藿素作用24h后,其细胞凋亡率分别为(14.17±1.16)%、(22.01±3.21)%、(28.71±2.17)%、(45.75±3.24)%；作用48小时后,其细胞凋亡率分别为(24.21±2.17)%、(43.52±4.15)%、(71.57±3.26)%、(79.19±4.54)%。分析发现4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L、32μmol/L的淫羊藿素分别作用于人骨肉瘤MG-63细胞24、48小时,随着药物浓度的持续增加,其早期凋亡率和晚期凋亡率也逐渐增加,具有统计学意义(P<0.05)；在相同淫羊藿素浓度下,药物作用48小时的人骨肉瘤MG-63细胞凋亡率明显高于作用24小时的MG-63细胞凋亡率,以4μmol/L、8μmol/L和16μmol/L浓度组为明显,其中16μmol/L浓度组作用效果最为显著。可见,淫羊藿素诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡存在时间和药物浓度的相关性。其诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的药物作用的趋势和MTT结果大致符合。4.4μmol/L、8μmol/L的淫羊藿素作用于人骨肉瘤MG-63细胞24小时、48小时,其Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性相对于对照组没有明显的增强(P>0.05),其三种酶的活性随作用时间及药物浓度的变化而增强的趋势不明显。16μmol/L的淫羊藿素作用于人骨肉瘤MG-63细胞24小时,其Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性相对于对照组有明显的增强(P<0.05),在本药物浓度下作用48小时,较24小时作用时间下酶活性没有明显的增强(P>0.05)。32μmol/L的淫羊藿素作用于人骨肉瘤MG-63细胞24小时,其Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性相对于对照组及16μmol/L组有明显的增强(P<0.05),在本药物浓度下作用48小时,较24小时作用时间下酶活性没有明显的增强(P>0.05)。故在一定药物浓度下,淫羊藿素诱导人骨肉瘤MG-63凋亡与Caspase-9,8,3的活性增加有相关性。结论：1.淫羊藿素能抑制人骨肉瘤MG-63细胞的体外增殖,呈时间及浓度依赖性。2.淫羊藿素可诱导人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡,呈时间及浓度依赖性。3.淫羊藿素诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡可能与Caspase-9,8,3活性增加有关。