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细菌可以产生、释放并感应一种被称为自体诱导物(autoinducers,AI)的化学信号分子,这种信号分子的浓度随着菌群密度的增加而增加。根据信号分子浓度的变化,细菌可以探知到周围菌群浓度的变化情况。当信号分子浓度达到一定阈值时,细菌会彼此感应,启动或调控相关基因的表达,从而改变菌群行为。这种由AI介导的细菌集群行为被称为群体感应(quorum sensing,QS)。相当一部分致病菌和条件致病菌的致病基因表达受到QS机制的调控,因此群体感应抑制剂(quorum sensing inhibitors,QSI)极具开发成新型抗菌药物的潜能。然而化学合成的QSI如溴化呋喃等普遍存在毒性较大的问题,限制了其被用于临床,因此寻找对人类低毒甚至无毒的QSI是目前群体感应抑制剂研究的重要方向。本研究主要应用生物活性跟踪技术分离纯化香菇与金针菇中具有抑制菌体感应的化合物,成功获得两种单体化合物,并对其相对结构进行了解析,并初步分析它们抑制条件致病菌的集群行为,主要研究结果如下:1、四种食用菌粗提物均具有QSI潜能以香菇、金针菇、金耳、杏鲍菇为原材料,分别制备其甲醇浸提物。以Chromobacterium violaceum CV026作为群体感应抑制活性指示菌,分别测试四种食用菌甲醇粗提物的QSI活性。实验结果表明:四种粗提物均具有一定的QSI活性,暗示粗提物中均含有抑制群体感应系统的化合物,其中香菇和金针菇的粗提物QSI活性较高。2、微量QSI活性检测分析体系的建立建立指示菌CV026的色素抑制活性微量检测体系以跟踪粗提物分离纯化过程中含有QSI活性的馏分,探索了有机溶剂类型及信号分子浓度对QSI活性检测的影响。研究结果表明:高丝氨酸内酯(C6-HSL)信号分子浓度高于10?M即可有效启动CV026的群体感应;在2 m L离心管中,200μL至500μL CV026培养物具备检测分离纯化馏分中是否含有抑制QS活性物质的潜能;甲醇加入量低于3%(V/V),乙酸乙酯加入量低于2%(V/V),不对QSI微量检测体系分析结果产生影响。3、香菇子实体中QSI活性化合物的鉴定比较香菇不同有机试剂浸提物的QSI活性,结果表明乙酸乙酯浸提物的QSI活性最高。大量制备乙酸乙酯浸提物,应用硅胶柱层析柱和半制备高效液相色谱组合等技术手段,成功从香菇乙酸乙酯浸提物中分离纯化出一个具有抑制CV026群体感应抑制活性的单体化合物。采用液相色谱质谱联用仪和核磁共振分别测定化合物的分子量和相对结构。根据质谱结果ESI-MS m/z:279.23[M-H]-,判断分子量为280.23。核磁共振13C谱、DEPT谱中显示化合物中存在18个C,其中含4个不饱和碳(128.05-130.38 ppm)、12个CH2(22.73-34.09 ppm)和1个CH3(14.22 ppm);根据核磁1H谱,δH 5.31-5.41之间出现的多重峰信号这表明化合物中所含有4个双键氢,化学位移在1.24-1.40之间的16个氢是8个亚甲基上的氢。综合质谱与核磁谱图信息,可以大致推测化合物的分子式可能为C18H32O2。进一步结合COSY,HSQC,HMBC谱图信息,最终推测化合物可能为顺9-顺12-十八碳二稀酸(亚油酸)。4、金针菇子实体中QSI活性化合物的鉴定采用类似于香菇子实体中QSI活性化合物的鉴定流程,对金针菇子实体乙酸乙酯粗提物进行QSI活性化合物的鉴定,实验结果表明从金针菇中共分离得到两个具有QSI活性的单体化合物,分别命名为化合物1与化合物2。分别对两个化合物进行质谱分析,结果表明化合物1与化合物2的分子量分别为280.23与278.23。分别对化合物1与化合物2进行核磁共振检测。化合物1的结果与香菇中QSI活性化合物相似,表明化合物1为亚油酸。对化合物2的核磁13C谱、DEPT谱进行分析,表明化合物2中存在18个C,其中6个不饱和双键CH(128.05-130.38 ppm)、10个CH2(22.73-34.09 ppm)和1个CH3(14.22 ppm);根据核磁1H谱表明在化学位移5.31-5.40之间出现的多重峰信号多个不饱和碳上的氢,化学位移在1.29-1.40之间是CH2上的氢。综合质谱与核磁谱图信息,可以大致推断分子式为C18H30O2。通过上述数据以及COSY,HSQC,HMBC并最终确定化合物2是全顺式9,12,15-十八碳三烯酸(α-亚麻酸)。5、亚油酸抑制条件致病菌色素形成或浮游行为应用气象色谱质谱联用仪(GC-MS)对香菇与金针菇来源的亚油酸样品,商品化亚油酸样品(CAS:60-33-3)进行鉴定比较分析,发现三者均于14.2 min处出现主离子峰,提取14.2 min主峰的质谱图数据,显示三者主要离子碎片和特征碎片高度一致,证明三者为同一物质。用商品化亚油酸进行生物学活性测试,结果表明在亚油酸在200?M时,可抑制红色粘质沙雷氏菌61%的红色素产量;在5 m M时,能显著抑制铜绿假单胞菌和粘质沙雷氏菌MG1的浮游行为。