【摘 要】
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背景与目的:肾母细胞瘤（Wilms Tumor）是儿童第二常见的实体器官腹部肿瘤,年发病率为每十万儿童8.1人,平均诊断年龄为3岁,大部分儿童发病年龄在14岁。通过优化使用现有的治疗策略,包括化疗、肾切除和放射治疗,5年生存率90%,接受治疗的患者约15%会复发,复发后总的生存率约为50%。肿瘤患者生存率和生存质量的提高,是临床治疗肿瘤的重要目标,特别是该病主要发生在低龄儿童群体中,更应得到医学各
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背景与目的:肾母细胞瘤（Wilms Tumor）是儿童第二常见的实体器官腹部肿瘤,年发病率为每十万儿童8.1人,平均诊断年龄为3岁,大部分儿童发病年龄在14岁。通过优化使用现有的治疗策略,包括化疗、肾切除和放射治疗,5年生存率90%,接受治疗的患者约15%会复发,复发后总的生存率约为50%。肿瘤患者生存率和生存质量的提高,是临床治疗肿瘤的重要目标,特别是该病主要发生在低龄儿童群体中,更应得到医学各个领域的特别关注,因此如何更为有效的靶向治疗肾母细胞瘤,降低其转移率与复发率,成为了临床研究的热点。本研究通过应用慢病毒载体敲减ZMIZ1基因,建立稳定转染肾母细胞瘤细胞株,通过体内、体外实验观察敲减ZMIZ1基因对肾母细胞瘤侵袭转移的影响,探究肾母细胞瘤侵袭转移相关的标志物,为基因靶向治疗肿瘤提供新的治疗方案。方法:应用生物信息学数据库（GCBI数据库和Oncomine数据库）检索ZMIZ1在肾母细胞瘤中的表达;收集临床肾母细胞瘤组织蜡块样本,应用免疫组织化学方法检测ZMIZ1在癌和癌旁组织中的表达差异;LV-ZMIZ1-RNAi转染肾母细胞瘤细胞,建立敲减ZMIZ1稳定转染肾母细胞瘤细胞株。应用细胞划痕实验、Transwell小室实验以及通过裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞,建立经血运途径形成的肺转移动物模型来观察敲减ZMIZ1基因对肿瘤细胞转移的影响;通过qRT-PCR和Western blot检测Notch信号通路关键基因Notch、Jagged1、HES-1的表达情况,对裸鼠心、肝、脾、肺、肾脏组织连续切片,行HE染色,对肺组织转移灶进行Notch信号通路关键蛋白免疫组织化学技术,探讨影响肾母细胞瘤侵袭转移信号通路机制。结果:1.Oncomine数据库中样本显示ZMIZ1在肾母细胞瘤中较正常组织中有表达差异（P<0.05）,收集的临床肾母细胞瘤石蜡组织样本中ZMIZ1表达为中等和强阳性表达。2.ZMIZ1与Notch1多基因相关疾病排名前20中,肾组织肿瘤位于第18位,威尔姆斯肿瘤蛋白1（WT1）是ZMIZ1基因高度相关的转录因子。3.体外细胞划痕实验显示ZMIZ1敲减组能够抑制肾母细胞的迁移（P<0.05）;Transwell实验显示ZMIZ1敲减组24 h侵袭细胞数少于对照组（P<0.05）;裸鼠肺转移模型中,各组裸鼠饮食、饮水量无统计学差异,ZMIZ1敲减组裸鼠体重增长幅度大于对照组（P<0.05）,8 w后处死,ZMIZ1敲减组裸鼠肺部形成的转移结节数量较其他组少（P<0.05）,且HE切片镜下观与正常组比,心、肝、脾、肺、肾组织无明显病理异常。4.qRT-PCR和Western blot分别检测了Notch信号通路中Notch1、Jagged1、HES-1 mRNA和蛋白的表达,ZMIZ1敲减组均低于对照组。裸鼠肺组织转移灶行免疫组织化学染色,ZMIZ1敲减组较对照组WT1、Notch1、Jagged1、HES-1、ZMIZ1表达为弱（P<0.05）。结论:敲减ZMIZ1基因能抑制肾母细胞瘤细胞在体外的侵袭迁移能力和体内的肺转移能力;敲减ZMIZ1后Notch信号通路中关键受体Notch1、关键配体Jagged1、下游靶基因HES-1蛋白的表达下调,表明敲减ZMIZ1影响了Notch信号通路相关蛋白的表达,进而参与并影响肿瘤侵袭转移进程,提示ZMIZ1可能是影响肾母细胞瘤侵袭转移的潜在基因靶点。
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