目的:肿瘤标志物是目前临床常用的血清学检测指标,多用于肿瘤的初筛、肿瘤患者治疗后的病情监测以及预后评估。在已发现的肿瘤标志物中,甲胎蛋白（ɑ-fetoprotein,AFP）和癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen,CEA）是其中两种临床上比较常用的检测项目。AFP是原发性肝癌的特异性指标,CEA则作为广谱标志物应用于多种消化道肿瘤的辅助性检测。流式荧光微阵列技术是近年来逐渐兴起的一种肿瘤标志物检测方式,检测除了同样具备灵敏度高、重复性好、线性范围广等优点之外,还具备了其他发光类技术所不具备的高通量检测能力,是未来蛋白和核酸检测的应用趋势。在本研究中,我们构建一种基于流式荧光微阵列技术的联合检测甲胎蛋白和癌胚抗原的方法,并将其用于临床样本的检测。方法:基于生物素与亲和素特异性结合的特性制备捕获抗体和检测抗体。将生物素化的AFP和CEA的单克隆抗体分别与特定的亲和素化荧光编码微球连接,以双抗体夹心法为基本检测原理,构建联合检测肿瘤标志物的方法,并对该检测方法进行系统的方法学评估。我们收集了102例血液样本,通过将医院检测结果（临床样本的受检方法为化学发光法）与新建联合检测方法测得结果进行比较,获得判定系数（R~2）。结果:检测单个项目时,在孵育时长60分钟的条件下,AFP检测和CEA检测的线性范围分别为0.39-1600 ng/m L和0.14-2312.5 ng/m L;AFP重复性检测和CEA重复性检测的变异系数分别为CV＜3.3%和CV＜2.4%;AFP检测和CEA检测的回收率分别在91.71%-106.81%的范围内和93.19%-106.89%的范围内;AFP检测和CEA检测的批内差变异系数分别为CV＜5.8%和CV＜5.5%;AFP检测和CEA检测的批间差变异系数分别为CV＜7.1%和CV＜9.2%。在交叉反应中,AFP与CEA分别对二者的检测试剂几乎不产生影响。二者的检测试剂在200天内均性质稳定。溶血对该检测方法两种肿瘤标志物的检测结果影响较大,且在AFP浓度高达12800 ng/m L时和CEA浓度高达37000 ng/m L时才会出现HOOK效应。AFP与CEA真实临床样本检测结果与医院报告值的线性拟合度均较好,判定系数分别为R~2＞0.93和R~2＞0.906。在缩短孵育时长分别为15分钟和5分钟时AFP的线性范围均为0.39-1600 ng/m L,而CEA的线性范围均为0.14-2312.5 ng/m L。在联合检测中,当孵育时长为60分钟时,AFP检测的线性范围为0.78 ng/m L-800 ng/m L,CEA检测的线性范围为1.13 ng/m L-1156.25 ng/m L。结论:该检测方法在孵育时长为60分钟时对单个血清中的肿瘤标志物进行检测,其检测系统表现出灵敏度高,线性范围广,特异性好,精密度高,准确度高等良好性能。该检测方法出现HOOK效应的阈值较高,且利用该检测方法对临床真实样本进行检测的结果与医院检测报告值线性拟合度好,证明检测结果的可靠性高。另外,在检测过程中要注意标本的溶血情况,以确保检测结果的准确性。当缩短孵育时长分别至15分钟和5分钟时,所检测项目的线性范围并不受影响,即该检测方法可以在5分钟孵育时长得出检测结果。在联合检测中,该检测体系的线性范围略小于单个指标的检测范围,但仍然满足实际检测中的应用。目前,该项研究还在进一步推广到同时检测更多肿瘤标志物的过程中。肿瘤标志物与恶性肿瘤密切相关,其在临床上被广泛的用于肿瘤高危筛查、辅助诊断、预后跟踪及复发监控等环节。我们的研究工作有助于开发肿瘤标志物的快速联检试剂盒,具有较高的临床应用价值。