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自1990年Kitagawa等首次发现脑缺血预处理现象以来，人们在探讨其机制和寻找具有临床可行性的预处理方法等方面进行了大量研究。本实验室首次发现重复电针灸(频率为2／15Hz的疏密波，1mA，30min／d，连续5天)刺激大鼠百会穴可模拟脑缺血预处理效应。电针刺激参数是影响针效和改变针效机制的重要因素，电针的不同刺激参数所引起的反应及其反应机制可能有所不同。因此，本实验对各种电针刺激参数进行全方位组合，研究不同刺激参数对脑缺血耐受效应的影响，寻找电针灸预处理诱导大鼠脑缺血耐受效应的最佳刺激参数组合；在此基础上进一步研究阿片受体和内源性阿片肽在重复电针灸预处理诱导大鼠脑缺血耐受机制中可能发挥的作用，为深入探讨电针灸预处理诱导脑缺血耐受机制提供科学依据。第四军医大学祠贞创匕学位论文 脑缺血耐受效应的影响，寻求最佳的刺激参数组合。2.探讨阿片受体是否参与重复电针灸预处理诱导大鼠脑缺血耐 受的形成，并研究可能参与作用的阿片肤种类。3.研究重复电针灸刺激大鼠百会穴能否刺激内源性阿片肤释放 增加，为证实内源性阿片肤参与重复电针灸预处理诱导的脑缺 血耐受效应提供实验依据。方法1.应用嵌套设计研究不同刺激参数及其组合对电针灸诱导大鼠 脑缺血耐受效应的影响 应用嵌套设计，将210只SD大鼠随机分为35组(每组=6只)，分别为空白对照组、戊巴比妥钠组、电针组:a连续波:lmA+ZHz，lmA+15Hz，lmA+3OHz，lmA+100Hz，ZmA+ZHz，ZmA+15Hz，ZmA+30Hz，ZmA+100Hz，3mA+ZHz，3n1A+15Hz，3mA+30Hz，3mA+100Hz:b间断波:lmA+2/OHz，lmA+15/OHz，lmA+30/OHz，lmA+100/OHz，ZmA+2/OHz，ZmA+15/OHz，ZmA+30/OHz，ZmA+1 00/OHz，3mA+2/OHz，3n1A+15/OHz，3mA+30/OHz3mA+100/OHz;e疏密波:lmA+2/15Hz，lmA+2/30Hz，lmA+2/100Hz，ZmA+2/15Hz，ZmA+2/30Hz，ZmA+2/100Hz，3mA+2/15Hz，3mA+2/30Hz，3mA+2/100Hz。最后一次处理24h后采用颈内动脉尼龙线线栓法致右大脑中动脉栓塞(MCAO) (12Omin)模型。再灌注24h行神经功能障碍评分(NDS)后取脑，经TTC染色计算脑梗死容积。第四军医大学周五d二学位.沦文2.阿片受体在重复电针灸刺激大鼠百会穴诱导脑缺血耐受效应中 的作用 雄性SD大鼠42只，随机分为空白对照组，戊巴比妥钠组，电针(EA)组，电针+6受体拮抗剂naltrindole(NTI)组，电针十K受体拮抗剂nor-binalto甲himine(nor-BNI)组，6受体拮抗剂naltrindole(NTI)组和K受体拮抗剂nor一binalto印himine(nor-BNI)组。空白对照组每日腹腔注射生理盐水4mL瓜g/d，连续5天;其余各组每日腹腔注射1%戊巴比妥钠40m叭留d，连续5天;戊巴比妥钠组不做其它处理，EA组、EA+NTI组和EA十nor一NBI组接受相同电针灸刺激(疏密波2八SHz，lmA，3omi可d)连续5天，EA+NTI组和EA+nor-BNI组分别于每次电针灸开始前给予NTI(1 mg瓜g)或nor一BNI(2 .smg瓜g)腹腔注射;NTI组和nor一BNI组单纯腹腔注射相同剂量的NTI或nor一BNI。最后一次处理24h后采用MCAO (12Omin)模型。再灌注24h进行神经学评分后取脑，经TTC染色计算脑梗死容积。3.重复电针灸预处理后大鼠脑内甲硫脑啡肤表达的免疫组织化 学研究 雄性SD大鼠12只，随机分为空白对照组，戊巴比妥钠组和电针灸预处理组。空白对照组每日腹腔注射生理盐水4mL瓜g/d，连续5天;其余两组每日腹腔注射1%戊巴比妥钠40m叭g/d，连续5天;戊巴比妥钠组不做其它处理，电针灸预处理组取大鼠百会穴进行电针灸刺激(疏密波2/15Hz，lmA，30mi可d)，连续5天。最后一次处理24h后灌注取脑，制作冰冻切片，利用甲硫脑啡肤的特异性抗体(R曲bit anti一RatE吐ephalin Met)按ABC法进行甲硫脑啡肤免疫组第四军医大学五灭士学位论文织化学的观察。并对不同脑片纹状体区的脑啡肚免疫阳性细胞进行肉眼记数。结果1.应用嵌套设计研究不同刺激参数及其相互组合对电针灸诱导 大鼠脑缺血耐受效应的影响 脑梗死容积:三种电流强度(l mA、ZmA和3mA)间无统计学差异(P=0.3657)。三种波形I旬有明显差异(P=0.004)。ZHz--100Hz各频率间有显著差异(P<0.0001)。33个电针组分别与空白组梗死容积比较，除连续波In1A+30Hz，ZmA+30Hz，lmA+100Hz，ZmA+1 00Hz，3mA+100Hz及间断波lmA+100/0 Hz，ZmA+100/0Hz，3mA+100/0 Hz无统计学差异外，其余均有统计学差异(P<0.05)。其中，疏密波2/15Hz，2/30Hz以及连续波ZHz刺激时脑梗死灶最小。 神经功能学评分:再灌注24小时后，各组神经学评分之间有统计学差异(P值<0.05)。电针组的神经功能评分都优于戊巴比妥钠对照组和空白对照组。2.阿片受体在重复电针灸刺激大鼠百会穴诱导脑缺血耐受效应 中的作用 脑梗死容积:再灌注24h后各组之间有显著差异(P=0.000)。电针灸组(84.5土20.3nun3)，明显小于空白对照组(286.5士28.8mm3)(P=0.000);电针灸+6受体拮抗剂naltrindole组(260.6士25.2 mm3)与空白组比较没有明显的统计学?