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枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,简称Bs)是目前微生物杀菌剂中应用最为成功的菌种之一。对多种病原菌如真菌、细菌等具有抑制作用。采用分子生物学技术对枯草芽孢杆菌进行遗传改良,进一步提高枯草芽孢杆菌的防治效果是目前研究的热点。本研究的目的就是将已经从大豆细菌性斑点病菌(Pseudomonas syringae pv. glycinea)中克隆的hrpZPsg12基因,构建在枯草芽孢杆菌的表达载体中,转化至枯草芽孢杆菌模式菌株Bs168和具有生防活性的枯草芽孢杆菌BcXl中,并对其生理生化性状及室内生防活性进行鉴定,为进一步研制新型的生物农药奠定基础。具体研究结果如下：1.成功构建了BcX1/pHCMC05-hrpZPsg12-gfp和Bs168/pHCMC05-hrpZPsg12-gfp重组表达菌株。利用已经构建好的载体pMD18-gfp和pGEX-4T-hrpZPsg12进行PCR扩增分别得到gfp和hrpZPsgl2基因片段,再把hrpZPsgl2和gfp分别与pMD18-T载体连接,将双酶切后的目的基因hrpZpsg12和gfp分别与表达载体pHCMC05进行连接,获得pHCMC05-hrpZPsg12-gfp重组质粒。将构建好的重组质粒转化到大肠杆菌克隆菌株DH5α进行重组子鉴定,鉴定正确的pHCMC05-hrpZPsg12-gfp载体转入大肠杆菌BL21(DE3)及枯草杆菌Bs168和BcXl中。2.优化了工程菌株BcX1/pHCMC05-hrpZPsg12-gfp和Bs168/pHCMC05-hrpZPsg12-gfp的蛋白表达条件并检测了蛋白的表达。优化后的蛋白表达条件为：摇瓶培养37℃至OD600为0.8时加入终浓度为0.2mM的IPTG诱导8h。用荧光显微镜可以检测到有荧光存在说明gfp-hrpZPsg12融合蛋白已表达。但是采用超声破碎方法,硫酸铵沉淀方法,SDS-PAGE检测蛋白效果不明显。3.研究了枯草芽孢杆菌BcXl和重组枯草芽孢杆菌BcX1工程菌生理生化特性的变化,并且通过平板对峙培养的方法测定两者抑菌效果的变化。重组枯草芽孢杆菌BcX1工程菌生理生化特性没有改变,但对植物病原真菌的抑菌效果与枯草芽孢杆菌BcXl比较均有增强效应。