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目的应用靶向DNMT1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)转染体外培养的人脑胶质瘤细胞,观察其对胶质瘤细胞增殖,克隆和周期的影响,为临床在基因水平上治疗胶质瘤提供方法和依据。方法利用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)技术对62例不同级别人脑胶质瘤组织中DNMT1基因的表达及与病理分级相关性进行检测并分析。用以靶向DNMT1的si RNA转染体外培养的两种人脑胶质瘤细胞株(A172和U87),敲减胶质瘤细胞株内DNMT1基因,将其设为转染组(实验组),并将其实验结果和仅予以转染si RNA阴性对照序列的胶质瘤细胞株(对照组)的实验结果做比较并进行相关分析。应用定量反转录聚合酶连锁反应(quantificational real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)分析DNMT1基因在胶质瘤细胞中表达的变化;蛋白质印迹法(Western blot,wb)分析DNMT1,PCNA和Cyclin D1蛋白表达变化;采用噻唑蓝(MTT)比色法和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力情况;应用流式细胞分析法(Flow cytometry,Fc)检测细胞周期分布情况。观察DNMT1基因表达减少后对A172和U87胶质瘤细胞增殖、克隆形成和周期分布的影响。结果免疫组化结果显示,不同级别人脑胶质瘤组织中DNMT1基因表达均异常上调,且与胶质瘤临床病理分级呈正相关(P<0.05)。在A172和U87的胶质瘤细胞实验中,与对照组比较,定量反转录聚合酶连锁反应表明实验组中DNMT1m RNA表达明显减少(P<0.01);蛋白质印迹法表明实验组DNMT1,PCNA和Cyclin D1蛋白表达水平明显降低(P<0.01);MTT法检测表明实验组中活的胶质瘤细胞数明显低于对照组(P<0.05);细胞克隆形成实验表明,实验组中胶质瘤细胞克隆形成能力和对照组相比较明显受到抑制(P<0.01);流式细胞分析法显示,实验组中的胶质瘤细胞周期中G0/G1明显延长﹙P<0.01﹚。上述的实验结果差异均具有统计学意义。结论靶向DNMT1基因的si RNA重组质粒可以减少人脑胶质瘤细胞内DNMT1基因的表达,从而抑制胶质瘤细胞的增殖及克隆形成能力,并使胶质瘤细胞周期中G0/G1明显延长。