乳腺癌组织中COX-2、TRX-1表达及其与临床病理特点、预后的关系前言近年来研究表明环氧化酶-2(COX-2)在许多实体肿瘤中(如结直肠癌、肺癌等)呈过度表达，并与肿瘤的发生、发展密切相关，COX-2高表达的肿瘤患者预后较差。乳腺癌中COX-2亦呈过度表达，且与预后有关，但国内外鲜有COX-2与无病生存期关系的文献。目前临床上使用选择性COX-2抑制剂来改善COX-2过表达的肿瘤患者预后，但因其心血管的毒副作用而限制了使用范围，而且疗效尚未得到肯定。因此我们需要更多了解诱导COX-2表达因素，如果能抑制其上游调控因子的水平，则能更好达到控制肿瘤生长、改善患者预后的目的。但现阶段我们对COX-2调控机制尚不清楚。近年国外研究显示在体外非小细胞肺癌细胞系实验中发现硫氧还蛋白-1(TRX-1)可以通过低氧诱导因子-1α(HIF-1α)促进COX-2的表达，另一篇也在入组的结直肠癌患者临床实验中证实了TRX-1与患者预后有关，但目前国内外尚无COX-2、TRX-1在乳癌中联合表达及与预后相关的文献报道。因此本研究采用免疫组织化学SP法对乳癌组织COX-2、TRX-1的表达进行检测，并分析它们与临床病理参数及无病生存期(DFS)间的关系。实验方法1、病例和标本122例乳腺癌组织石蜡标本来自于中国医科大学附属第一临床学院接受乳腺癌根治性切除术的病人。患者术前均未接受放疗或化疗，术后22例(18.0％)接受了紫杉醇类药物化疗，入选病例均为女性，平均年龄50.2岁，肿块≤2cm 32例(26.2％)，发生淋巴结转移66例(54.1％)，临床TNM分期Ⅲ期患者34例(27.9％)，病理类型为浸润性导管癌88例(72.1％)。从手术日期到复发转移或随访截止日期(2006年12月)确定为患者无病生存期(DFS)，为6～59个月，平均32.2个月，共有32例(26.2％)复发转移病例。122例乳腺癌癌组织取15例正常乳腺组织作为对照。2、试剂TRX-1多克隆抗体购自Cell Signaling公司，COX-2多克隆抗体、SP检测试剂盒和DAB显色剂购自福建迈新生物技术有限公司。3、方法乳癌芯片制作。采用免疫组化SP法，按照SP检测试剂盒说明书所示步骤进行，切片经柠檬酸缓冲液(PH=6.0)高压热修复预处理。4、结果判定COX-2的判定以胞浆中出现棕黄色颗粒为显色，TRX-1的判定以胞浆或胞核中出现棕黄色颗粒为显色。各选取5个高倍镜视野(×400)作阳性细胞计数，以阳性细胞数≤10％为阴性，＞10％为阳性。5、统计分析方法采用SPSS13.0软件，进行卡方检验，Spearman秩相关、Kaplan-Meier生存曲线分析。实验结果1、COX-2、TRX-1在乳腺癌组织中的表达及相关性122例乳腺癌组织COX-2、TRX-1的阳性表达率分别为58.2％、54.1％，15例正常乳腺组织未检出COX-2、TRX-1表达；COX-2与TRX-1的表达呈正相关(r=0.286，P=0.001)。2、COX-2、TRX-1表达与乳腺癌临床病理特征的关系经统计学分析，COX-2表达与肿块大小(r=0.192，P=0.034)、淋巴结转移(r=0.186，P=0.040)、临床分期(r=0.193，P=0.033)呈正相关，与ER(r=-0.183，P=0.044)、HER-2表达(r=-0.194，P=0.032)及组织分级(r=-0.197，P=0.029)呈负相关，与PR(r=-0.175，P=0.054)表达无关；TRX-1表达与肿块大小(r=0.236，P=0.009)、临床分期(r=0.206，P=0.023)呈正相关，与淋巴结转移(r=0.175，P=0.054)无关，与ER(r=-0.033，P=0.722)、PR(r=-0.043，P=0.635)、HER-2(r=-0.041，P=0.654)表达及组织分级(r=-0.107，P=0.242)无关。3、乳腺癌组织COX-2、TRX-1表达与无病生存期的关系经Kaplan-Meier生存曲线分析，COX-2表达与DFS呈负相关，log-rank检验有统计学意义(P=0.046)，COX-2阳性表达组病人复发率(31.0％)高于阴性表达组(19.6％)。TRX-1表达与DFS虽呈负相关趋势，但无统计学意义(P=0.056)，TRX-1阳性表达组病人复发率(34.8％)，阴性表达组(16.0％)。COX-2与TRX-1共检验时与DFS呈负相关，log-rank检验有统计学意义(P=0.042)。4、乳腺癌组织COX-2、TRX-1表达与临床病理参数多因素分析采用Cox比例危险度模型对入组患者9种可能与乳癌预后有关的指标进行多因素分析。结果显示：无论COX-2或COX-2、TRX-1共检验均不能作为判断乳癌预后的独立因素；TNM临床分期也不能作为判断乳癌预后的独立因素；淋巴结转移、组织分级、ER、PR、HER-2表达是影响乳癌预后独立因素；肿块大小P值接近0.05，可能与乳癌预后密切相关。5、乳腺癌组织TRX-1表达与紫杉醇类药物耐药的相关性使用紫杉醇类药物患者共22人，其中TRX-1阳性病人复发率40.0％(4／10)，阴性病人复发率25.0％(3／12)，确切概率法检验P=0.652。结论1、乳腺癌组织中COX-2、TRX-1均呈高表达且二者表达呈正相关性。COX-2表达与肿块大小、临床分期、淋巴结转移呈正相关，与ER、HER-2表达及组织分级呈负相关，与PR表达无关；TRX-1阳性表达与肿块大小、临床分期呈正相关，与淋巴结转移、ER、PR、HER-2表达及组织分级无关。2、COX-2阴性表达的乳癌病人无病生存期高于阳性表达病人，预后相对较好，COX-2可能作为判断乳癌病人预后的重要指标之一；虽然TRX-1阴性表达的乳癌病人无病生存期与阳性表达病人相比没有统计学差异，但P值接近0.05，增大样本量或延长随访时间可能会出现阳性结果；COX-2、TRX-1共检验时P值更有意义，对判断乳癌病人预后也有重要意义。Cox比例危险度模型结果显示：无论COX-2或COX-2、TRX-1共检验均不能作为判断乳癌预后的独立因素；TNM临床分期也不能作为判断乳癌预后的独立因素；淋巴结转移、组织分级、ER、PR、HER-2表达是影响乳癌预后独立因素；肿块大小P值接近0.05，可能与乳癌预后密切相关。3、TRX-1与紫杉醇类药物耐药关系虽然无统计学差异，但是影响患者预后及耐药因素很多，尚需扩大样本量或进一步进行多因素分析。4、构建组织芯片进行免疫组化检测具有产出量高、成本低、误差小、准确性高等优点。