阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease, AD)是一种严重的神经退行性疾病,其发病机制尚没有定论,很多研究表明Aβ及其聚集体是AD发生发展的重要影响因素,因此研发能够针对Aβ聚集体的抑制剂或药物成为越来越受到关注的研究热点之一。在基于抗Aβ抗体治疗AD的方法中,目前多采用人源化多克隆或单克隆抗体和小分子单链抗体等,与之相比,纳米抗体由于制备成本低、容易跨越血脑屏障等优点,在抗体疗法中受到越来越多的研究和关注。另外,已有的研究表明,Aβ的氮端不参与Aβ的聚集,用于临床实验的能够识别Aβ氮端的抗体因为能引起机体更强的炎症反应而不得不停止临床实验；而Aβ中间片段是与Aβ聚集相关的关键位点以及毒性片段,极易形成β折叠结构,而β折叠正是Aβ聚集体主要的结构特点,能够识别Aβ聚集区段的抗体的炎症反应相对较低,因此,筛选能够特异性结合Aβ中间段的纳米抗体对于抑制Aβ的聚集和探索Aβ聚集机制将具有重要意义。本论文选择Aβ肽全长的中间段Aβ12-35作为抗原,筛选其纳米抗体,并通过E.coli表达系统制备纳米抗体,并探讨了其对Aβ聚集能力的影响。本论文研究内容如下：(1)纳米抗体基因序列的筛选。以Aβ12-35单体作为抗原,通过抗原的定点固载,利用噬菌体展示库技术,经过4轮淘选,ELISA测定亲和活性,从Aβ42噬菌体免疫库中筛选得到DP4、DP6、DP18和DP36四种纳米抗体基因序列。(2)纳米抗体的表达纯化。通过PCR扩增、双酶切等方法将4种纳米抗体基因克隆到表达载体pET23a;重组质粒在宿主菌E.coli Shuffle T7和E.coli Origami 2(DE3)中实现了可溶性表达。纯化后其纯度均能达到90%以上。经ELISA活性检测,S-DP4, O-DP4, S-DP6, O-DP6表现出较好的抗原结合活性。Biacore测定其亲和常数,S-DP6亲和常数最高,约为10-7,其他三种亲和常数在10-6,结果与ELISA基本相符。(3)纳米抗体的功能研究。ELISA结果表明,纳米抗体S-DP6除了能识别Aβ12-35单体和聚集体,还能识别Aβ40和Aβ42的单体和聚集体；体外利用ThT荧光法和电子显微镜检测发现,所获得的纳米抗体S-DP6对Aβ12-35单体的聚集和纤维化有抑制作用；对已形成的Aβ12-35纤维有解聚作用。总之,本论文筛选获得的纳米抗体对多种Aβ都有识别作用,且可以影响Aβ的聚集过程,为Aβ聚集引起的疾病机理的研究提供了很好的研究材料。