目的:2型糖尿病伴牙周炎患者牙周组织炎症发展较快,炎症控制较难,且牙槽骨破坏更严重。课题组前期研究结果显示,在2型糖尿病伴牙周炎牙周微环境中,牙周膜干细胞由于受到相关毒力因子的影响,其生物学性能可能发生改变。而炎症状态的牙周膜干细胞是否还可通过旁分泌途径实现对临近牙槽骨骨髓间充质干细胞的影响,加剧牙槽骨的破坏?目前还不甚清楚。为此,本实验拟通过提取2型糖尿病伴牙周炎患者牙周膜干细胞外泌体,观察其对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响,并通过高通量测序,筛选2型糖尿病伴牙周炎牙周膜干细胞外泌体差异表达的mi RNA,进一步探索2型糖尿病伴牙周炎发展的机制并为治疗该疾病提供理论依据。方法:1)收集健康人、单纯牙周炎患者和2型糖尿病伴牙周炎患者牙周膜组织,通过酶消化法培养牙周膜细胞（H-h PDLSCs、P-h PDLSCs、DP-h PDLSCs）,通过骨组织块法培养h JBMSCs,并对四种进行常规传代纯化培养,通过流式细胞术进行表型鉴定并检测向成骨、成软骨、成脂分化分化潜能。提取H-h PDLSCs、P-h PDLSCs、DP-h PDLSCs外泌体（H-EXO、P-EXO、DP-EXO）,通过透射电镜、NTA、WB进行鉴定。2)将H-EXO、P-EXO、DP-EXO分别加入培养基,与h JBMSCs孵育16h,倒置荧光显微镜观察外泌体是否被h JBMSCs摄取;将外泌体加入成骨诱导培养基,对h JBMSCs进行成骨诱导,7天后进行碱性磷酸酶染色,21天后进行茜素红染色,并通过RT-PCR和WB检测成骨相关基因和蛋白（ALP、RUNX2、BMP2、COL1）,检测其对h JBMSCs骨向分化能力的影响。3)H-EXO、P-EXO、DP-EXO通过高通量测序,Target Scan、Mir Base数据库预测差异表达的mi RNAs靶基因,KEGG和GO对预测的靶基因进行富集分析,探究差异基因参与的功能和通路。结果:1)培养出H-h PDLSCs、P-h PDLSCs、DP-h PDLSCs以及h JBMSCs,流式细胞术结果均显示四种细胞均均高表达间充质干细胞表面抗原。DP-h PDLSCs向成骨、成软骨、成脂分化潜能降低。外泌体鉴定结果显示,H-EXO、P-EXO、DP-EXO均符合外泌体特征。2)倒置荧光显微镜镜下可观察到,H-EXO、P-EXO、DP-EXO均能被h JBMSCs摄取;ALP染色及茜素红染色结果显示H-EXO组能促进h JBMSCs成骨,P-EXO组与OS无明显差别,DP-EXO组则抑制h JBMSCs成骨。RT-PCR和WB结果显示H-EXO可促进h JBMSCs成骨相关基因和蛋白表达,P-EXO与OS组无统计学意义,DP-EXO则抑制h JBMSCs成骨相关基因和蛋白表达（P＜0.05）。3)GO富集分析显示:在生物学过程中,富集最显著的前三条分别是:信号转导、转录调控、RNA聚合酶Ⅱ对转录的正向调控。在细胞组成中,富集最显著的前五条分别是:胞膜、胞浆、胞核、膜的组成、细胞溶质。在分子功能中,富集最显著的前三条为分别是:蛋白结合、金属离子结合、DNA结合。通过KEGG富集分析,富集到最显著的五条通路有:癌症通路、PI3K-Akt信号通路、Ras信号通路、肌动蛋白细胞骨架的调节、癌症中蛋白聚糖。DP-EXO中mi R-23a-3p表达较H-EXO和P-EXO表达升高。结论:合并牙周炎和2型糖尿病的牙周微环境可使h PDLSCs多向分化潜能降低,DP-h PDLSCs分泌的外泌体可降低h JBMSCs成骨分化潜能,从而降低牙槽骨自我修复能力。牙周微环境的变化可改变牙周膜干细胞外泌体mi RNA,mi R-23a-3p可能是DP-EXO抑制h JBMSCs成骨分化的关键mi RNA,但是引起h PDLSCs外泌体mi RNA含量改变和引起h JBMSCs成骨分化潜能改变的机制仍需要进一步研究。