论文部分内容阅读
【目的】通过采用BALB/c型小鼠OVA诱导制造哮喘小鼠模型,加以三子养亲汤和地塞米松干预,观察三子养亲汤对哮喘模型气道阻力,病理、BLAF中白细胞总数及肺组织中炎性因子等方面的影响,探究其有效性及有效浓度,并寻找三子养亲汤可能的作用靶点,为后期的研究提供一定的依据。【方法】首先以21只BALB/c雌性小鼠,分三组(空白组Con、雾化组AI、滴鼻组ND)进行造模实验,分别观察各组小鼠左肺组织病理变化(HE染色)、BALF总白细胞计数变化和右肺组织TNF-α及INF-γ因子的变化(ELISA法),确定动物实验造模方法。后期以8周龄BALB/c雌性小鼠78只为研究对象,随机设为6组。分别为空白对照组(Con),哮喘造模组(A),三子养亲汤高剂量治疗组(SH)、中剂量治疗组(SM)、低剂量治疗组(SL)及地塞米松治疗组(DXMS)。每组12只,于清洁级动物房适应性饲养10天。造模组(A组、SH、SM、SL、及DXMS组)小鼠于1和14天上午腹腔注射(ip)A液致敏,第二次致敏后当天下午,滴鼻(nd)激发。第25至27天ip麻醉后,连续B液滴鼻3天,空白对照组(Con)致敏与激发均以0.9%Na Cl溶液代替,给予的时间、剂量与其他各组均相同。各组小鼠于第28天开始用三子养亲汤高(24mg/ml)、中(12mg/ml)、低(6mg/ml)三个浓度进行为期一周的干预治疗,中药组(SH、SM、SL)小鼠每日进行灌胃处理,DXMS组小鼠按照每只1mg/kg/d的剂量ip给药。第35天开始测量气道阻力值并处死小鼠,取血液检测血清中Ig E浓度、取肺泡灌洗液测定白细胞总数及嗜酸性粒细胞占比值、取左肺组织病理切片观察,右肺组织经全自动样品研磨仪研磨后ELISA法测量其匀浆中TNF-α、IL-2、IL-6、IFN-γ、IL-12p70、IL-4、IL-5、IL-13的含量,观察三子养亲汤对支气管哮喘的治疗作用。体外实验采用人气道上皮NCI-H292细胞,分别设control组(Con)、EGF组(EGF,50ng/ml)、三子养亲汤组(SZYQT,1mg/ml)、及EGF加三子养亲汤组(EGF+SZYQT,浓度与前两组相同),加药24h后荧光定量PCR检测MUC5AC表达水平。【结果】本实验中各组小鼠表象及行为观察,哮喘模型组(A)抓耳挠鼻、呼吸深重症状明显,其余各OVA致敏组均有不同程度的减轻,其中三子养清汤高剂量组(SH)用药7天后,表象与正常组没有明显差别,正常组(Con)小鼠无明显症状。肺泡灌洗液总细胞计数和EOS占总细胞数百分比的实验研究表明,三子养亲汤中、高剂量的应用,可以显著降低哮喘小鼠模型气道和肺泡中炎性细胞的数量(P<0.05)。血清Ig E实验检测的结果显示,可以认为三子养亲汤中、高剂量的应用,可一定程度降低哮喘小鼠模型血清中Ig E的含量,其中此两组间比较没有统计学意义(P>0.05),证明这两种剂量的应用对血清Ig E含量的影响没有区别。且实验结果显示,三子养亲汤中、高剂量可可逆性的降低气道增生的程度,改善气道和肺泡紊乱的情况。气道阻力检测结果证明汤剂中高剂量能有效降低哮喘小鼠气道阻力升高的情况(P<0.05)。中药中、高剂量组小鼠肺组织中各炎性因子除IL-2(P>0.05)外,其他细胞因子均不同程度降低。【结论】1.三子养亲汤可以有效降低哮喘小鼠血清Ig E含量及小鼠BALF中炎性细胞的数量,并且降低肺组织中部分炎性因子的含量。2.三子养亲汤能显著降低哮喘小鼠模型的气道阻力值,改善哮喘小鼠的肺顺应性。3.三子养亲汤中高剂量的应用对支气管哮喘具有一定的治疗作用。4.三子养亲汤可以降低EGF诱导的NCI H292人气道上皮细胞MUC5AC的高表达。