目的:旨在探讨血管内皮生长因子受体-2（VEFGR-2/KDR）在神经内分泌型前列腺癌（NEPC）组织中的表达差异及其与NEPC的临床分期、血清PSA水平、Gleason评分及患者生存之间的关系,并进一步在体外细胞水平及体内动物实验验证KDRQ472H突变与肿瘤细胞的增殖能力及侵袭能力的关系,同时通过体外和体内实验探讨该突变位点是否是血管内皮生长因子受体-2的小分子酪氨酸激酶抑制剂（VEGFR2-TKI）阿帕替尼的有效位点以及进一步分析KDR突变和VEGFR2-TKI疗效的相关性。最终鉴定KDR突变在NEPC的发生发展及治疗中的作用。方法:1.将前期收集的20例NEPC患者,根据二代测序结果分为KDR突变组及KDR野生组两组。应用免疫组化检测在20例NEPC临床样本中KDR蛋白的表达差异。并将免疫组化结果与患者的临床分期、血清PSA水平及Gleason评分等之间的关系进行统计学分析及生存预后分析;2.培养NEPC细胞系PC3,构建KDRQ472H突变体质粒。建立稳定过表达KDRQ472H及过表达KDRwt的PC3细胞株。通过细胞计数、平板克隆实验、划痕实验及Transwell侵袭实验验证过表达KDRQ472H及过表达KDRwt的细胞株的增殖能力和迁移侵袭能力,应用Western blot方法检测突变体系中相关信号分子的表达情况。应用不同浓度的药物（阿帕替尼）干预各组细胞系,进行侵袭和增殖实验,检测各组细胞系对于阿帕替尼的敏感性,从而验证KDR突变对VEGFR2-TKI的疗效的预测作用。3.分别将过表达KDRQ472H及过表达KDRwt的PC3细胞株,接种裸鼠,通过裸鼠皮下成瘤实验,进一步验证KDR基因突变的恶性生物学行为以及KDR突变后对于阿帕替尼药物的敏感性。最后通过三部分的实验结果,综合评估KDR突变在神经内分泌型前列腺癌发生发展中的生物学作用,以及VEGFR2-TKI对KDR突变型NEPC的抑制作用。结果:1.免疫组化方法对20例临床标本进行KDR蛋白表达检测结果:突变组所有患者KDR表达都是阳性,高表达率为75%,未突变组KDR高表达率为19%,突变组与未突变组比较表达有明显统计学差异（P=0.032）。从结果可以看出,KDR突变的患者的蛋白表达明显高于KDR未突变的患者。对这些资料进行临床病理分析,单因素和多因素分析结果显示:确诊NEPC时转移灶≥3和KDR高表达患者的生存期分别短于转移灶<3及KDR低表达的患者,是患者生存的独立预后因素。2.将空载体质粒、KDR野生型质粒和KDRQ472H突变体质粒分别转染到PC3细胞系中,经筛选建立稳定过表达KDRQ472H及过表达KDRwt的PC3细胞株。转染成功后,进行MTT增殖实验及平板克隆实验,结果显示:转染突变体质粒的细胞系增殖能力大于其他各组细胞,统计学具有显著性差异（P<0.05）。细胞划痕实验结果示:KDR突变组细胞伤口愈合百分比最高,与其他各组比较具有显著性差异（P<0.05）。Transwell实验结果证明KDRQ472H突变组细胞侵袭数目明显大于其他组细胞（P<0.05）。Western blot实验结果示KDRQ472H突变促进了ERK的磷酸化。体内动物实验结果:接种过表达KDRQ472H细胞系的裸鼠皮下移植瘤生长速度比接种过表达KDRwt细胞的移植瘤生长速度要快。免疫组化结果KDRQ472H组移植瘤KDR均为高表达,而KDRwt组移植瘤的KDR均为低表达。3.不同浓度阿帕替尼作用于KDR野生型细胞系(KDRwt)和KDRQ472H细胞系,MTT法进行细胞增殖实验,测定阿帕替尼在各组细胞的IC50值。结果KDRwt组IC50值为（18.38±1.13）μmol/l,KDRQ472H组IC50值为（8.46±0.16）μmol/l。确定后续实验阿帕替尼作用浓度为15μmol/l。平板克隆实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验结果示:阿帕替尼作用后,KDRQ472H组细胞克隆形成能力、细胞迁移能力及侵袭能力均明显下降,与KDRwt组比较,差异均具有统计学意义。体内动物实验结果:KDRwt组移植瘤,阿帕替尼作用后,抑瘤率为6.7%。而KDRQ472H组移植瘤经阿帕替尼作用后,生长速度明显减慢,阿帕替尼对该组的抑瘤率为53.2%。结论:1.在NEPC患者中,KDR突变的患者,KDR蛋白表达增高。而KDR蛋白高表达患者生存期短于低表达患者,是NEPC患者的独立预后因素。2.体外细胞实验证实KDRQ472H基因突变促进了人NEPC细胞的恶性生物学行为,使其增殖、迁移、侵袭能力增强。可能是通过激活MAPK通路发挥作用。KDRQ472H突变促进了神经内分泌型前列腺细胞在体内的增殖和生长。3.体内体外实验结果显示阿帕替尼对KDRQ472H基因突变后的NEPC作用更加敏感。我们有理由推测KDR基因可作为预测及治疗NEPC的一个极具潜力价值的新靶点,具有重要的应用前景。