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目的:检测高糖对人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein EndothelialCells,HUVEC)的IKCa1通道蛋白的表达,初步探讨IKCa1离子通道在高糖诱导HUVEC的凋亡中的作用,为糖尿病血管病变的治疗提供新思路。 方法:选用HUVEC为研究对象,对其进行体外培养,首先通过免疫荧光技术和RT-PCR实验,验证IKCa1通道在HUVEC细胞中的表达;然后配置不同浓度的葡萄糖作用于细胞(0,5.5,11,22,33mM),建立体外HUVEC高糖模型;通过MTT实验、显微镜观察和Hoechst染色,检测不同浓度葡萄糖对HUVEC生长的抑制情况,以及HUVEC的形态变化和凋亡情况;采用RT-PCR和westernblot技术测定不同浓度葡萄糖对HUVEC中IKCa1蛋白的表达,同时检测凋亡分子caspase-3的表达变化;使用IKCa1通道的特异性开放剂DCEBIO,检测其抑制高糖诱导HUVEC凋亡的作用。 结果:(1)免疫荧光染色和RT-PCR实验结果显示,IKCa1通道在HUVEC中存在并表达。(2)MTT实验证实,不同浓度葡萄糖对HUVEC生长存在抑制作用,活细胞的数量随着提高葡萄糖浓度而逐渐减少,细胞的存活率显著下降,提示该抑制作用呈现浓度依赖性。(3)细胞培养实验及Hoechst染色实验显示,高浓度的葡萄糖对HUVEC细胞的生长有抑制作用,并诱导细胞凋亡。(4)RT-PCR实验发现在不同浓度葡萄糖诱导HUVEC细胞凋亡后,caspase-3的mRNA在分子水平变化不明显,但下调IKCa1蛋白的mRNA的表达。(5) Western blot实验结果发现,不同浓度葡萄糖作用HUVEC后,IKCa1表达随着葡萄糖浓度升高而逐渐降低,caspase-3蛋白的表达随着葡萄糖浓度升高而逐渐增加;加入IKCa1离子通道开放剂DCEBIO后,caspase-3蛋白在各实验组的表达无显著差异。 结论:体外培养的HUVEC表达IKCa1;不同浓度的葡萄糖对HUVEC有浓度依赖性抑制作用并诱导凋亡;IKCa1离子通道通过下调caspase-3蛋白的表达对高糖诱导的HUVEC凋亡有抑制作用。