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本研究工作分为两部分内容:非侵入性产前检测中性染色体非整倍体异常特异性影响因素的研究、双胎之一消亡导致非侵入性产前检测假阳性病例研究。一、非侵入性产前检测中性染色体非整倍体异常特异性影响因素的研究目的评估非侵入性产前检测(Non-invasive Prenatal Testing,NIPT)中性染色体非整倍体异常疾病检测的阳性预测值,研究导致检测结果假阳性的原因。方法2016年11月至2018年3月,青岛市妇女儿童医院基因检测中心对23,984例单胎孕妇进行NIPT检测,提示为性染色体非整倍体异常的病例经遗传咨询,知情同意选择羊水穿刺产前诊断或新生儿染色体核型检查。对其中假阳性病例依次进行孕妇染色体核型分析、胎盘性染色体荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)检测。进而将无性染色体非整倍体异常的病例作为假阳性组,采用配对研究方法,按照1:1比例匹配,同检测批次、同孕周、BMI±5、检测结果为低风险病例为配对组,进行孕妇血浆白细胞全基因组测序拷贝数变异(Copy number variation sequencing,CNV-seq)检测,应用配对卡方检验(McNemerc2检验)及线性回归,分析两组中CNV数量与片段大小的差异、CNV与NIPT中X染色体Z值的关系。结果1.NIPT对于性染色体异常疾病的阳性预测值为31.7%(39/123),对于ChrX(-)、ChrX(+)、ChrX(+)Y、ChrY(+)、ChrX(-)Y的阳性预测值分别为17.5%、60.0%、56.5%、100%、0%。2.进行侵入性产前诊断或新生儿染色体核型分析的孕妇123例,其中84例为性染色体非整倍体假阳性,在假阳性孕妇中检出性染色体非整倍体异常8例(8/84),染色体结构异常1例。3.假阳性中核型分析正常的病例,孕妇分娩后收集胎盘21例进行FISH检测,1例存在胎盘性染色体非整倍体局限性嵌合(1/21)。4.假阳性组无性染色体非整倍体异常的76例孕妇中,检出11例存在X染色体CNV,缺失重复片段介于0.1~11Mb,其中>1Mb的4例;配对组孕妇中,检出8例存在X染色体CNV,片段长度均小于1Mb。经配对卡方分析,X染色体拷贝数变异情况在两组之间中无显著性差异。对CNV大于1Mb的病例进行线性回归分析,表明NIPT提示X染色体Z值与CNV大小之间存在显著的正相关关系(R2=0.99,P<0.05)。结论1.NIPT对于性染色体的阳性预测值为31.7%,对于NIPT提示性染色体非整倍体异常的孕妇需要进行侵入性诊断确诊。2.母体性染色体非整倍体异常、母亲性染色体拷贝数变异和胎盘局限性嵌合是导致NIPT性染色体异常假阳性的重要因素,分别占比约9.5%(8/84)、4.76%(1/21)、5.26%(4/76)。3.孕妇性染色体拷贝数变异是造成NIPT假阳性的原因之一,与CNV大小有关。4.对于NIPT提示性染色体非整倍体异常的孕妇,临床医生应建议进行染色体核型分析的同时进行基因芯片/CNV-seq检测,以排除胎儿可能存在的性染色体致病性的拷贝数变异情况。二、双胎之一消亡导致非侵入性产前检测假阳性病例研究目的探究双胎之一消亡导致非侵入性产前检测假阳性结果的原因、规律和持续时间。方法在不同孕周对1例双胎之一消亡的孕妇进行3次NIPT检测,分析消亡前后胎儿游离DNA浓度的变化以及对NIPT结果的影响。实施存活胎儿的产前诊断,并在分娩后对活产儿胎盘、纸样胎及其胎盘进行荧光原位杂交、荧光定量PCR和组织病理学分析,明确双胎及其胎盘的遗传学诊断和病理变化,同时检索双胎之一消亡导致NIPT假阳性病例8例,分析双胎之一消亡影响NIPT结果的持续时间。结果双胎之一消亡后胎儿游离DNA在孕妇外周血中短期内增多,但持续一段时间后不再影响检测结果。消亡胎儿组织及胎盘绒毛呈现广泛退变坏死改变。结论双胎之一消亡导致NIPT假阳性的原因是异常胎儿消亡后仍持续释放胎儿游离DNA至孕妇外周血中。早、中孕期双胎之一消亡对NIPT结果的影响至少持续7~8周,但不超过12~14周。