论文部分内容阅读
由于人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）和丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）传播途径相类似，都可以通过输血、静脉吸毒、性传播、母婴垂直传播等途径传播，故两者合并感染率高。据统计，HIV感染者中约有1/3合并 HCV感染，合并感染已成为全球性的重要公共卫生问题。随着高效抗逆转录病毒治疗（highly active anti-retrovirus therapy，HAART）的广泛普及，HIV/艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）患者的病死率及生存状况得到明显改善，使 AIDS由一种“绝症”逐渐转化成了一种可控的慢性病。肝脏相关疾病是非 AIDS相关疾病导致 HIV患者死亡的首要死因，而合并 HCV感染更加明显。因此合并感染者需联合抗病毒治疗，即 HAART加抗 HCV治疗，来延缓 HCV相关的肝病进展和降低抗逆转录病毒（antiretroviral drug，ARV）药物相关的肝损伤。HIV/AIDS患者须终身 HAART用药，其长期毒副作用逐渐凸现，以核苷类逆转录酶抑制剂（Nucleoside reverse-transcriptase inhibitors NRTIs）引起的线粒体毒性为主。 目前关于 NRTIs对 HIV单一感染者线粒体结构和功能的影响研究已经比较深入，而关于 HIV/HCV合并感染者线粒体毒性的研究较少。对于合并感染者，两种病毒本身对线粒体均有一定的影响，抗病毒药物之间存在潜在的相互作用及重叠的毒副作用，使线粒体损伤情况十分复杂。与单纯 HCV感染相比，合并感染者治疗难度大、持续病毒学应答率(Sustained VirologicalResponse，SVR)较低，但国外有研究发现在接受 HAART出现线粒体毒性症状的患者后续采用干扰素加利巴韦林抗 HCV时，快速病毒学应答(Rapid Virological Response，RVR)和SVR明显高于无线粒体毒性症状者，尤其是使用大剂量利巴韦林患者明显。因此，阐明病毒、药物等对线粒体毒性的影响，及其对病毒学应答的影响，并探索反映线粒体毒性较敏感的指标，不仅便于指导临床用药方案的合理选择及更换具有重要意义，亦是国家十二五重大科技专项的目的之一。 本研究第一部分以我国成人 HIV／HCV合并感染人群和HIV单一感染人群为研究对象，比较 HAART前及治疗不同时间点外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMC）内 mtDNA含量、TK2及 p53R2转录水平并进行分析其差异，探讨 HIV、HCV及抗 HIV药物对合并感染者线粒体毒性发生的影响；第二部分以不同 CD4水平的2组 HIV／HCV合并感染人群为研究对象，研究抗 HIV抗 HCV联合治疗（即 HAART(+)PR(+)组）及抗 HCV单独治疗（即HAART(-)PR(+)组）的不同时间点 PBMC内 mtDNA含量、TK2及 p53R2转录水平差异，探讨抗病毒药物对合并感染者线粒体毒性发生的影响；第三部分比较HIV/HCV合并感染者接受 Peg-IFN-α-2а/RBV（PR）治疗后不同临床转归的mtDNA含量，分析影响疗效的临床相关因素，探讨线粒体损伤程度与抗病毒疗效的关系。 研究目的： 观察抗病毒治疗对 HIV/HCV合并感染者、HIV感染者外周血相关线粒体指标的变化，探索较敏感的检测指标，分析引起线粒体毒性的影响因素；研究HIV/HCV合并感染者线粒体毒性与病毒学应答率的关系；初步探讨 HIV/HCV合并感染者不同免疫水平抗病毒治疗发生线粒体毒性情况。 研究方法： 选择广州市第八人民医院国家“十二五”国家科技重大专项课题“HIV合并HCV感染人群抗病毒治疗”接受 Peg-IFN-α-2а/RBV治疗 HIV/HCV合并感染者14例、接受 HAART+Peg-IFN-α-2а/RBV治疗的合并感染者37例、接受 HAART合并感染者33例以及接受 HAART HIV感染者42例为研究对象；应用实时荧光定量 PCR检测所有患者基线与治疗后不同时间点 PBMCs中线粒体 DNA含量、TK2及 P53R2转录水平；检测合并感染者接受 Peg-IFN-α-2а/RBV治疗或联合HAART后的病毒学应答情况、治疗前后免疫学及血清学生化指标，评价线粒体损伤对病毒学应答的影响。所有数据采用SPSS16.0统计软件进行统计学处理。 研究结果： 第一部分 1．HIV/HCV合并感染者 HAART后 mtDNA含量（mtDNA/nDNA）降低（治疗前、HAART12周、24周、48周、72周及96周分别为39.20、40.37、35.23、35.05、33.75、31.31），HIV单一感染者 HAART后 mtDNA含量变化趋势为先升高后降低（分别为43.83、41.5、52.33、59.45、51.395、46.36）；HIV/HCV合并感染组 HAART24周、48周、72周及96周外周血中mtDNA含量明显低于HIV单一感染者（Z=-2.009、-2.95、-2.812和-3.075，P＜0.05）。 2．HIV/HCV合并感染者及 HIV感染者 HAART后 TK2表达量均增加（治疗前、HAART12周、24周、48周、72周及96周分别为4.18、4.31、4.41、5.40、5.52、5.36和4.31、5.09、4.77、4.70、5.46、5.21），两者不同时间点比较均无统计学意义（P＞0.05）。 3．HIV/HCV合并感染者 HAART后 p53R2表达量增加（治疗前、HAART12周、24周、48周、72周及96周分别为1.27、1.58、1.46、1.83、1.56、2.28）；HIV单一感染者 HAART后 p53R2表达量变化趋势为先降低后增加（分别为1.66、1.68、1.53、1.37、1.98、1.88）；与 HIV感染者比较，合并感染者治疗48周、96周后表达量明显升高（Z=-2.113和-2.797，P＜0.05）。 第二部分 1．HIV/HCV合并感染者 HAART(+)PR(+)组治疗后 mtDNA含量增加（HAART前基线、PR前基线、12周、24周、48周及治疗结束后24周分别为40.52、50.06、50.19、55.9、64.93、70.23），HAART(-)PR(+)组治疗后 mtDNA含量变化趋势为先升高后降低（分别为40.245、46.395、44.5、59.81、35.78）；HAART(+)PR(+)组 mtDNA含量在治疗各时间点高于 HAART(-)PR(+)组，其中24周及 PR治疗结束后24周有显著性差异（Z=-1.981和-3.369，P＜0.05）。 2．HIV/HCV合并感染者HAART(+)PR(+)组及HAART(-)PR(+)组治疗后TK2表达量均增加（治疗前、12周、24周、48周、治疗结束后24周分别为6.07、5.31、6.36、6.27、6.4和5.76、6.41、6.14、6.88、9.06）；两组不同时间点比较均无统计学意义（P＞0.05）。 3．HIV/HCV合并感染者HAART(+)PR(+)组治疗后p53R2表达量无明显变化（治疗前、12周、24周、48周、治疗结束后24周分别为4.16、4.07、4.09、4.15、4.03），HAART(-)PR(+)组治疗后 p53R2表达量增加（4.07、4.31、4.29、6.75、9.0）；与 HAART(+)PR(+)组比较，HAART(-)PR(+)组治疗结束后24周 p53R2表达量明显升高（Z=-1.986，P＜0.05）。 第三部分 1．HIV/HCV合并感染者 SVR组基线 CD4+T细胞计数为（279.96±50.09个/ul），高于 non-SVR组（202.56±76.96个/ul，P＜0.01）。 2．HIV/HCV合并感染者 SVR组及 non-SVR组抗病毒治疗过程中血红蛋白均有下降（HAART前基线、PR前基线、4周、12周、24周、36周、48周分别为122.411±27.60、128.05±22.27、120±20.73、119±20.60、136.35±24.03、138.95±21.85、128.75±21.17和124.56±16.03、112.78±9.31、99±12.82、104.44±14.04、105.13±21.18、101.44±13.59、98.14±27.51）；non-SVR组血红蛋白在 PR4周、24周、36周及48周明显低于 SVR组（P＜0.05）。 3．HIV/HCV合并感染者 SVR组及 non-SVR组治疗后 mtDNA含量增加（治疗前及治疗12周、24周、48周、治疗结束后24周分别为46.35、47.47、46.475、65.85、60.66和60.505、63.09、78.76、69.06、71.83）；SVR组 mtDNA含量低于 non-SVR组，但无统计学意义。 4．血红蛋白水平与 mtDNA含量不存在相关性。 结论： 1．在目前常用的线粒体毒性检测指标中，mtDNA含量是检测 PBMC线粒体毒性的敏感指标； 2．HIV/HCV合并感染者 HAART后 mtDNA含量低于 HIV单一感染者，具有显著性差异。表明 HIV/HCV合并感染者线粒体损伤比单一 HIV感染者重； 3．HIV/HCV合并感染者 HAART+PR治疗后线粒体损伤反而比未 HAART轻，提示：HIV或 HCV感染本身也会导致线粒体损伤； 4．相对高 CD4+T细胞水平（200-350个/ul）下，HAART早期联合抗 HCV治疗，没有明显增加线粒体毒性； 5．PBMC中TK2、p53R2的转录水平呈反馈代偿性升高，其机制可能成为线粒体毒性研究的新方向； 6．线粒体毒性可能会影响 SVR；治疗前基线 CD4+T细胞水平及治疗过程中血红蛋白的水平是 HIV/HCV合并感染者病毒学应答的预测因素。