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目的 检测Neuropilin-2(神经纤毛蛋白-2,NRP-2)沉默后对HT-29如增殖、凋亡等多项生物学行为变化的影响。方法 培养结肠癌细胞株HT-29,待HT-29生长至对数期时将荧光siRNA搭载至脂质体后将其转入至HT-29细胞株中,常规培育48小时后通过荧光显微镜观察转染效率。将转染siRNA-NRP-2、转染siRNA-NRP-2的无意义序列、转染PBS的组别命名为转染组、无意义序列组以及空白对照组。使用实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测NRP-2 mRNA在不同组别细胞中表达量;吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)法通过染料对活细胞以及凋亡细胞的染色不同从而测定细胞的凋亡;MTT分别测定各组细胞活细胞的OD值来评估细胞的增殖情况;通过使用免疫细胞化学染色法检测增殖相关蛋白Ki-67蛋白在不同组别细胞中的表达情况;单层细胞划痕损伤修复实验检测不同组别细胞的划痕愈合率来检测细胞的迁徙能力;Transwell小室侵袭实验通过检测肿瘤细胞穿越小室膜的数量来判定细胞的侵袭能力。每组实验各重复3次。结果 1荧光siRNA应用脂质体Lipofectamine 2000转染至HT-29细胞培育48h,在荧光显微镜下观测细胞的转染效率为80%以上。2实时荧光定量聚合酶链反应实验的结果表明:相较于无意义序列组及空白对照组,转染组的NRP-2 mRNA的相对表达量显著降低,且其差异有统计学意义(P<0.05)。3吖啶橙/碘化丙啶双重染色实验的结果表明:相较于无意义序列组及空白对照组,转染组细胞的凋亡水平显著增高,且其差异有统计学意义(P<0.05)。4 MTT实验结果结果表明:当细胞培育至24h、48h、72h,相较于无意义序列组及空白对照组,转染组细胞的增殖能力的改变呈时间依赖性,且其差异有统计学意义(P<0.05)。5免疫细胞化学染色的结果表明:相较于无意义序列组及空白对照组,转染组细胞中Ki-67蛋白的表达量显著减少,且其差异有统计学意义(P<0.05)。6单层细胞划痕损伤修复实验的结果表明:相较于无意义序列组及空白对照组,转染组细胞经24h愈合后其划痕愈合率下降,且其差异具有统计学意义(P<0.05)。7 Transwell小室侵袭实验结果表明:相较于无意义序列组及空白对照组,转染组细胞通过上小室的基质膜至小室背面的细胞数量呈显著减少,且其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 1沉默NRP-2可促进HT-29细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁徙和侵袭能力。Ki-67蛋白表达下降可能是细胞增殖能力下降的因素之一。2为NRP-2可能成为治疗结肠癌靶向治疗的新的研究方向提供一定的理论基础。